הדמיה של שלפוחיות ציאנובקטריאליות חוץ-תאיות באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים שידור

Abstract

מקור: Biller, S. J., et al. בידוד ואפיון שלפוחיות חוץ-תאיות ציאנובקטריאליות. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים את הכנת השלפוחיות החוץ-תאיות של ציאנובקטריאליות למיקרוסקופ אלקטרונים על ידי צביעה שלילית, המאפשרת הדמיה ברזולוציה גבוהה של מורפולוגיה, גודל וטוהר השלפוחית לניתוחים מבניים והשוואתיים.

Protocol

1. אפיון השלפוחיות המבודדות

1. בצע מיקרוסקופ אלקטרונים להעברת כתמים שליליים (ראה טבלת חומרים) (TEM - מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה; גודל חלקיקים, מבנה, טוהר).
   1. כדי לשפר את איכות התמונה, פרוק זוהר את פני השטח של רשת TEM מצופה לשעבר באמצעות מערכת פריקת זוהר בהתאם להנחיות היצרן (ראה טבלת חומרים).
   2. יש למרוח בזהירות ~5 מיקרוליטר של דגימת השלפוחית ולהניח לשבת למשך 5 דקות.
      >הערה: דגימות עם ריכוזי שלפוחית >10⁹ מ"^ל-1 יתנו בדרך כלל את התוצאות הטובות ביותר; לדגימות מדוללות יותר יהיו מעט שלפוחיות לכל תמונה.
   3. הסר את הדגימה על ידי נגיעה בקצה הרשת בפיסת נייר סינון נקי.
   4. יש לזרוק טיפה של 20-50 מיקרוליטר של אורניל אצטט 2% (ראו טבלת חומרים) על משטח ישר המכוסה בסרט פלסטיק, ולהניח את הרשת הצפה עליו למשך 2 דקות.
   5. הסר אורניל אצטט באמצעות נייר סינון וצף לזמן קצר על טיפת מים טהורים במיוחד לשטיפה. חזור על שטיפת המים בפעם השנייה.
      הערה: הרשת היבשה הסופית מוכנה להדמיה לאחר שלב 1.1.5.

Materials