הערכת אינטראקציות בין חיידקים לתאים מארחים באמצעות חרוזים ביומימטיים

תקציר

מקור: Stones, D. H., et al. חומרים ביומימטיים לאפיון אינטראקציות חיידקים-מארחים. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים את השימוש בחרוזים בקטריומימטיים כדי לכמת הידבקות חיידקים לתאי אפיתל מארחים בתנאים תחרותיים. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בטיפול בתאים, ליזה שלהם וציפוי דילולים סדרתיים למדידת יחידות יוצרות מושבה.

פרוטוקול

1. מדידת הידבקות חיידקים
   1. בנקודות זמן מצוינות (למשל, שעה אחת לאחר ההדבקה), הסר מדיה משכבת התא.
   2. שטפו היטב את שכבת התאים עם מי מלח סטריליים ומחוממים מראש עם פוספט (PBS) (לפחות 3-4 כביסות של 1 מ"ל PBS כל אחת) כדי להסיר תאים לא מחוברים.
   3. Lyse תאים מארחים על ידי הוספת 1 מ"ל של תמיסה סטרילית של 1% v/v Triton X-100 ב-PBS לכל באר. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
   4. פיפטה כל דגימה למעלה ולמטה מספר פעמים לפני העברת התוכן של כל באר לצינורות נפרדים של 1.5 מ"ל. הכן דילול סדרתי פי 10 של דגימות ל-PBS סטרילי (למשל, השתמש ב-100 מ"ל של דגימה ו-900 מ"ל של PBS).
   5. צלחת 100 מיקרוליטר מכל דגימה על אגר לוריא-ברטאני (MLB) ימי ומפזר באמצעות מפזר תאים. בצע אופטימיזציה של הדילולים לצלחת בהתאם לזני החיידקים ולנקודת הזמן.
      הערה: עבור מערך הניסוי המתואר, דילולים של 10,⁵ או^{10, 6} פעמים נותנים מספר מתאים של יחידות יוצרות מושבה (CFUs).
   6. דגרו צלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס O/N וספרו חיידקים לפי ספירת מושבות.

חומרים