סרטון זה מדגים מודל עוברי של דג זברה לחקר זיהומים הקשורים לביו-חומרים מושתלים. הזרקת סטפילוקוקוס זהוב עם מיקרוספירות פוליסטירן משפרת את הישרדות החיידקים, ומאשרת את תפקידם של חומרים מושתלים בקידום זיהום.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ניתוח in vivo של זיהומים חיידקיים הקשורים להשתלה באמצעות עוברי דג זברה
436 צפיות
⸱
26 בספטמבר 2025
במאמר זה
תקציר
פרוטוקול
1. הכנת תרחיפי חיידקים בלבד וחיידקים-מיקרוספירות
הערה: נעשה שימוש בזן Staphylococcus aureus RN4220 המבטא חלבון פלואורסצנטי mCherry (S. aureus-mCherry). הזן S. aureus RN4220 עבר מוטציה בגן מווסת האלימות agrA (מווסת גן אביזר A), ולכן עשוי להיות בעל אלימות נמוכה יחסית במודל העובר של דג הזברה. ניתן להשתמש בזנים אחרים של S. aureus או במיני חיידקים אחרים לזיהום הקשור לביו-חומר (BAI).
- קח 4 עד 5 מושבות של חיידקי S. aureus RN4220 מצלחות תרבית אגר סויה טריפטית בתוספת 10 מיקרוגרם/מ"ל כלורמפניקול ותרבית את החיידקים לשלב גידול לוגריתמי ב-10 מ"ל של מרק סויה טריפטי בתוס....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1: הליך סכמטי של הזרקה משותפת של תרחיף חיידקים-מיקרוספירות לשריר הזנב של עוברי דג הזברה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אגר סויה טריפטי | BD דיפקו | 236950 | יחידת הכנת מדיה ב-AMC |
| מרק סויה טריפטי | BD דיפקו | 211825 | |
| פוליוויניל פירולידון40 | אפליקציה | א2259.0250 | |
| מיקרוספירות פוליסטירן בקוטר 10 מיקרומטר (פלואורסצנט כחול) | טכנולוגיית חיים/ThemoFisher | F8829 | |
| מיקרו-קפילרי זכוכית (1 מ"מ OD x 0.78 מ"מ קוטר פנימי) | מנגנון הרווארד | 30-0038 | |
| מכשיר מושך מיקרופיפטה | סאטר אינסטרומנט בע"מ | P-97 בוער | |
| מיקרוסקופ אור LM 20 | לייקה | MDG33 10450123 | |
| 3-חומצה אמינו-בנזואית (טריקאין) | סיגמא-אולדריץ' | E10521-50G | |
| אגרוז חבר פרלמנט | רוש | 11388991001 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו LM80 | לייקה | MDG3610450126 | |
| קצות פיפטה של מיקרו-מעמיס | אפנדורף | 5242956.003 | |
| מיקרומניפולטור M3301 עם מעמד M10 | מכשירי דיוק עולמיים | 00-42-101-0000 | |
| מיקרו-מזרק אקספרס FemtoJet | אפנדורף | ברקוד 5248ZO100329 | |
| מיקרוטרוב 2 מ"ל לאדם | סרשטדט | 72.693.005 | |
| חרוזי זירקוניה | חיבור ביולוגי | ברקוד 11079124ZX | |
| לייזר MagNA | רוש | 41416401 | |
| כלורמפניקול | סיגמא-אולדריץ' | ג0378 | |
| שייקר ג'ירוטרי (לגידול חיידקים) | ניו ברונסוויק סיינטיפיק | G10 | |
| חממת דג הזברה | VWR | קו אינקו | |
| קובטות | מותג | 759015 | |
| צנטריפוגה | הטיך-צנטריפוגן | רוטנטה 460R | |
| ספקטרומטר | רוקחות ביוטק | אולטרוספקט®2000 | |
| מלקחיים | סיגמא-אולדריץ' | F6521-1EA | |
| 48 צלחות באר | גריינר ביו-וואן | 677180 | |
| 96 צלחות באר | גריינר ביו-וואן | 655161 | |
| פטרי-צלחת | בז | 353003 | |
| פטרי-צלחת | ביומריו | NL-132 |
