$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. זני חיידקים
הערה: לצורך ניסוי זה נעשה שימוש בתשעה זנים סטנדרטיים, כולל Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris ו-Klebsiella pneumoniae. סלמונלה paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa ו-Proteus vuigaris יכולים לייצר H2S.
- הכנת תרבית חיידקים
- להעביר מושבת חיידקים אחת של סלמונלה paratyphi A, סלמונלה paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 ו-Klebsiella pneumoniae מצלחת אגר Luria-Bertani (LB) ל-100 מ"ל של מדיום LB ולתרבית ב-37 מעלות צלזיוס למשך 12-16 שעות עד שריכוז החיידקים הוא כ-1 x 109 תאים/מ"ל (כפי שמצוין על ידי OD600 = 1).
- העבירו מושבת חיידקים אחת של Fusobacterium nucleatum ו-Proteus vuigaris מצלחות אגר מרק סויה טריפטיקאז (TSB) ל-100 מ"ל של מדיום TSB ותרבית ב-37 מעלות צלזיוס באופן אנאירובי למשך 24 שעות עד שריכוז החיידקים הוא בערך 1 x 109 תאים/מ"ל (כפי שמצוין על ידי OD600 = 1).
2. בדיקת זיהוי H2S
- מבחן ייצור מימן גופרתי
- מערבבים 100 מיקרוליטר של תרבית חיידקים עם 100 מיקרוליטר של תמיסת ביסמוט שהוכנה לאחרונה (pH 8.0; 10 מ"מ ביסמוט (III) כלוריד, 0.4 מ"מ טריאתנולמין-HCl, 20 מ"מ פירידוקסל 5-פוספט מונוהידרט, 20 מ"מ EDTA (חומצה אתילנדיאמינטטראצטית) ו-40 מ"מ L-ציסטאין) בצלחות המיקרוטיטר של 96 בארות ובתרבית למשך 20 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. עבור כל זן חיידקים, בצע את הניתוח בשלוש עותקים.
- לאחר 20 דקות, בדוק אם יש שינוי צבע. אם צבע התמיסה משתנה מצהוב בהיר לשחור, זה מצביע על כך שהחיידקים מסוגלים לייצר H2S. חזור על מדידה זו פי 3.
- רגישות השיטה
- קבע את רגישות השיטה באמצעות ריכוזים שונים של נתרן הידרוסולפיד (NaHS): 2 מ"מ, 1 מ"מ, 0.8 מ"מ, 0.6 מ"מ, 0.4 מ"מ, 0.2 מ"מ, 0.1 מ"מ ו-0 מ"מ, מעורבב עם תמיסת BS (ביסמוט גופרתי).
- קבע את נוכחותו של HS−/S2− על ידי התבוננות בהיווצרות משקע BS שחור. ציין את צבע הבארות באמצעות סולם חזותי מחוסר הפקת צבע (-) לייצור צבע שחור כהה ביותר (++++++).