גידול חיידקים על שבב מיקרופלואידית לחקר עמידות לתרופות אנטיביוטיות

תקציר

מקור: Liu, P. C., et al. תכנון ושימוש במורבידוסטט אוטומטי בעלות נמוכה לאבולוציה אדפטיבית של חיידקים בבחירת תרופות אנטיביוטיות. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את השימוש בשבב מיקרופלואידי כדי להמחיש ולהשוות את הצמיחה והמורפולוגיה של זני E. coli מסוג בר ועמידים לטרימתופרים תחת לחץ אנטיביוטי טרימתופרים.

פרוטוקול

1. על ניסוי גידול שבבים

1. לפני הטעינה למכשיר המיקרופלואידי, יש לשטוף אותו במים נטולי יונים למשך שעה ומדיום M9 למשך שעה.
2. הפשירו את הדגימה הקפואה היומית בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות וחסנו מבחנה חדשה במדיום M9 טרי. מניחים את הדגימה באינקובטור שייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
3. לדלל את הדגימה המיקרוביאלית פי 10 עם מדיום M9 ולטעון אותה לתוך המכשיר המיקרופלואידי על ידי לחיצה על מיכל הדגימה המיקרוביאלית ב-5 psi. לאחר מכן טען את מדיום התרופה trimethoprim (TMP) לתוך השבב על ידי לחיצה על מיכל מדיום התרופה ב-5 psi. בצע את הערבוב בין החיידק לתרופה על ידי הפעלת השסתום המיקרומכני בין שני התאים על השבב המיקרופלואידי למשך 15 דקות.
4. הנח את השבב המיקרופלואידי בחממת המיקרוסקופ המותקנת על המיקרוסקופ ההפוך. רכוש את תמונת התא בתא הגידול כל שעה למשך 8 שעות עם מצלמת ה-CCD המותקנת על המיקרוסקופ ההפוך.
5. השתמש בקובץ ה- Script של התוכנית המותאמת אישית כדי לחשב את מספרי התאים באמצעות אלגוריתם סף בנתוני תמונת התא. שימו לב שנתוני מספר התאים הם בממוצע בדרך כלל על פני שלושה תאים מיקרופלואידיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ הפוך	לייקה מיקרוסיסטמס	Leica DMI-LED	משמש למדידה מיקרופלואידית השתמש באובייקט X40 NA=0.55
חממת מיקרוסקופ	מכשיר תא חי	CU-109	משמש למדידה מיקרופלואידית
שסתומים סולנואידליים	פנאומדין	S10 מ"מ-31-12-3	בדרך כלל פתוח 1.3 וואט 12 Vdc
כרטיס ממשק USB	הנדסת תחביב	מודול I/O דיגיטלי USBIO24-R	למדידת מיקרופלואידיקה
מדחס אוויר	רוקר סיינטיפיק	נדנדה 440	מקור לחץ למיקרופלואידים מקסימום לחץ 80 Psi
אביזרי נעילת לואר זכר עד 1/8 אינץ' דוקרנים	ValuePlastics.com	MTLL230-1	משמש לבקרה מיקרופלואידית
1/8 אינץ' דוקרנים ליציאת הברגה 10-32	ValuePlastics.com	ב-1	משמש לבקרה מיקרופלואידית
אביזרי נעילת לואר נקבה ליציאת הברגה 10-32	ValuePlastics.com	KFTL-1	משמש לבקרה מיקרופלואידית
טרנזיסטור NPN דרלינגטון 500mA, 40V (2N6427)	DigiKey.com	2N6427GOS-ND	משמש לבקרה מיקרופלואידית
10kOhm, נגד סרט פחמן, 0.25W	DigiKey.com	P10KBACT-ND	משמש לבקרה מיקרופלואידית
קבל טנטלום, 10uF, 25V, 10%	DigiKey.com	478-1841-ND	משמש לבקרה מיקרופלואידית
מצלמת CCD של אנדור	אנדור	זילה 4.2 פלוס SCMOS	משמש להדמיית מיקרופלואידיקה על שבב
טרימתופרים	סיגמא
Difco M9 מלח מינימלי פי 5	ב.ד.		בינוני