משקעי קלציט המושרים מיקרוביולוגית על ידי Sporosarcina pasteurii

תקציר

מקור: Bhaduri, S., et al., משקעי קלציט המושרים מיקרוביולוגית בתיווך Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את השיטה להעשרת Sporosarcina pasteurii באוריאה וסידן כלורי כדי לעורר פעילות אוראז, מה שמוביל להיווצרות גבישי קלציט גלויים באמצעות משקעי קלציט מושרים מיקרוביולוגית, או MICP.

פרוטוקול

1. פרוטוקול להעשרת חומרים מזינים להאצת משקעים

1. מעבירים 9 מ"ל מנוזל התרבות המוכן (תאים + בינוני) למספר צינורות צנטריפוגה מעוקרים, כל אחד בנפח 10 מ"ל.
2. הכינו תמיסת מלאי של 100 מ"ל של ההעשרה החיצונית המורכבת מארבעה רכיבים בריכוזים הבאים במדיום טרי: אוריאה: 2 גרם/ליטר, אמוניום כלוריד: 1 גרם/ליטר, סודיום ביקרבונט: 212 מ"ג/ליטר, סידן כלורי: 280 מ"ג/ליטר. מודדים בזהירות את כל המרכיבים באמצעות איזון אנליטי ומערבבים הכל מלבד אוריאה עם מדיום טרי בכוס ומניחים בחיטוי (121 מעלות צלזיוס, 15 psi, 15 דקות).
   1. לאחר החיטוי, יש לערבב את הכמות הנדרשת של אוריאה (2 מ"ג) עם 1 מ"ל של מדיום טרי ולהעביר אותה דרך מזרק המצויד במסנן מזרק של 0.22....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צלוחיות פיירקס	פישר סיינטיפיק	S63268	קורנינג ארלנמאייר
גליל מדידה	קול-פארמר	CP08559GC	צילינדר בוגר Cole-Parmer Class A עם Cal Cert, TC; 1000 מ"ל, 1/Pk
איזון אנליטי	אוהאוס	AX124E	משמש למדידת משקל ריאגנטים
אוטוקלאב	ברינקמן	58619000
סרט חיטוי	VWR	52428864
נייר אלומיניום	סיגמא-אולדריץ'	Z185140	משמש לאיטום הבקבוק לפני הכנסתו ל-Autoclave
מלאי חיידקים	סידרליין	11859	-80 מעלות צלזיוס מלאי של S. pasteurii, ATCC No. מוזכר כנגד קאט. לא.
פיפטורים מכניים חד-ערוציים של Mline, נפח משתנה	ביוהיט	725010	משווק ע"י VWR תחת מספר קטלוגי 14005976
קצה מיקרופיפטה	פישר סיינטיפיק	ברקוד 212772ב	משמש לגירוד לוחות אגר
אינקובטור	בינדר	80079098	חממת מיקרוביולוגיה, סדרת BF
אינקובטור רועד	VWR	14004300	חממות טלטול ספסל חתימה VWR
פרפילם	סיגמא-אולדריץ'	עמ' 7793	משמש לאיטום לוחות אגר
אוריאה	סיגמא-אולדריץ'	U1250	העשרה למדיום תזונתי
נתרן ביקרבונט	סיגמא-אולדריץ'	S8875	העשרה למדיום תזונתי
סידן כלורי	סיגמא-אולדריץ'	ג1016	העשרה למדיום תזונתי