מערכת גידול משותף לחקר התגובות המולקולריות של מארחי צמחים וחיידקים המקיימים אינטראקציה

תקציר

מקור: Nathoo, N., et al. מערכת גידול משותף הידרופונית לניתוח סימולטני ושיטתי של אינטראקציות ואיתות מולקולריות של צמח/חיידק. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מדגים מערכת גידול משותף הידרופונית לחקר אינטראקציות בין צמחים לחיידקים בתנאים סטריליים. שתילי צמחים מועברים למצע גידול סטרילי וחומצי, מודגרים ונבדקים לאיתור זיהום לפני החיסון באגרובקטריום. החיידקים הפעילים נצמדים לשורשי הצמח, מעבירים T-DNA לתאי הצמח ומקדמים שינויים מולקולריים המשפרים את ההתיישבות של החיידקים.

פרוטוקול

1. מערכת גידול משותף הידרופונית

1. הכן מדיום נוזלי Murashige ו-Skoog (MS): 2.165 גרם/ליטר מלחי בסיס MS, 10 גרם/ליטר סוכרוז, 0.25 גרם/ליטר 2-(N-מורפולינו)חומצה אתנסולפונית (MES), ו-59 מ"ל/ליטר תערובת ויטמינים B5, pH 5.75.
2. חיטוי המדיום. יוצקים 18 מ"ל ממנו לכל זכוכית גלילית סטרילית או מיכל פלסטיק שקוף (כלים מתגבשים, 100 על 80 מ"מ) עם מכסים סטריליים.
   הערה: עקרו מראש את המיכלים והמכסים על ידי עטיפתם בנייר אלומיניום וחיטוי.
3. בקולט אדים מעוקר, השתמשו במלקחיים סטריליים כדי להעביר בעדינות כל ריבוע רשת עם שתילים בני 10-14 יום מהמדיום המוצק למחצה למיכל גלילי הידרופוני (איור 1d). אטום את המכסים על המיכלים באמצעות סרט כירור....

תוצאות

איור 1: מערכת גידול משותף של צמח-מיקרוב הידרופוני. הפאנל השמאלי מייצג תרשים זרימה המתאר את ששת השלבים העיקריים בהרכבה ותפעול של מערכת הגידול המשותף ההידרופוני. הפאנל הימני מדגים את חומרי הניסוי, הציוד והנהלים התפעוליים בפועל עבור מערכת הגידול ה.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
זרעי צמחים (Arabidopsis thaliana Col-0)	מרכז המשאבים הביולוגיים ארבידופסיס	CS7000	https://abrc.osu.edu/order-stocks
חיידקים (Agrobacterium tumefaciens C58)	אוניברסיטת וושינגטון	לא ישים
חיידקים מסומנים	בתוך החברה		אופציונלי, תלוי בניתוחים במורד הזרם
מים מזוקקים כפולים	(שונות)
מיקרופיפטה	(שונות)
מלחי בסיס Murashige ו-Skoog (MS)	סיגמא-אולדריץ'	M5524
סוכרוז	(שונות)
MES	(שונות)
תערובת ויטמינים B5	סיגמא-אולדריץ'	G1019
פיטואגר	(שונות)
צלחות פטרי עמוקות	(שונות)
רשת נירוסטה	חברת מוצרי חוט מעבורת בע"מ	לא ישים	כיתה: 304; ספירת רשתות: 40 × 40; חוט DIA: 0.01
סרט מיקרופור, 1 אינץ'	3 דקות	1530-1
תא גידול יומי	(שונות)
מיכלי זכוכית גליליים, 100 × 80 מ"מ	פיירקס	3250	ניתן להשתמש בגדלים אחרים, ובמקרה זה ייתכן שיהיה צורך להתאים את תכולת הנוזל
מכסה מנוע זרימה	(שונות)
מלקחיים	(שונות)
תמצית שמרים	(שונות)
טריפטון	(שונות)
MgSO₄	(שונות)
אינקובטור רועד	(שונות)