$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. הכינו מכשירים, אמצעי תרבות, פתרונות וצלחות פטרי
1. קיסמי חיטוי בכוס של 50 מ"ל מכוסה בנייר אלומיניום כדי לשמור עליהם סטריליים.
2. עקר את כל הסחורה היבשה שתשמש (טיפים, מקלות, כלי זכוכית וכו') בחיטוי.
הערה: זהירות! עקוב אחר כל הוראות הבטיחות עבור דגם החיטוי בו נעשה שימוש. אוטוקלאבים מהווים סיכון לפיצוצים, כוויות מאדים ומגע עם משטחים חמים, חומרים ומדיה.
3. מכינים את אגר MS (קמח סויה מניטול (SFM)) לגידול תרבויות.
1. מוסיפים 5 גרם קמח סויה ו -5 גרם אגר לבקבוק של 1 ליטר.
2. ממיסים 5 גרם מניטול ב-250 מ"ל מי ברז ומוציאים לבקבוק המכיל את קמח הסויה והאגר.
3. הוסף פקק קצף ונייר כסף לפתח הבקבוק והחיטוי ב-121 מעלות צלזיוס, 15 psi למשך 30 דקות לפחות.
זהירות: המדיום הזה רותח בקלות. השתמש בבקבוק שיכול להכיל לפחות פי ארבעה מהנפח האמיתי של אגר MS שעובר חיטוי. ניתן להשתמש בסיר לחץ רגיל במקום חיטוי עם שיקולי בטיחות דומים. לחלופין, ניתן להשתמש בתנור מיקרוגל לעיקור מדיה וחומרים אם הגישה לחיטוי אינה אפשרית. מורים בתיכון עשויים גם לרצות לשתף פעולה עם מכללות או אוניברסיטאות מקומיות כדי לגשת לציוד חיטוי.
4. מצננים את המדיה עד שנוח מספיק לטיפול. היזהר לא לקרר אותו יותר מדי זמן מכיוון שאגר מתמצק בטמפרטורות מתחת ל-50 מעלות צלזיוס.
5. יוצקים אגר MS מהבקבוק לצלחות פטרי סטריליות עד שתחתית כל צלחת פטרי מלאה בערך למחצה (כ -25 מ"ל מדיה לכל צלחת פטרי). מניחים להתמצק לפני השימוש בצלחות אגר. אחסן צלחות אגר בשקית ניילון בטמפרטורת החדר עד הצורך.
הערה: ניתן לאחסן צלחות אגר גם במקרר, במיוחד אם יש צורך באנטיביוטיקה במדיה.
2. פס סטרפטומיצס על צלחות להתפשטות
1. סטרפטומיצס פס מתאמץ על לוחות אגר MS למושבות בודדות בשיטה סטנדרטית, כגון שיטת פס הרביע.
הערה: ניתן להשתמש בלולאת חיסון או בקיסמים סטריליים. אופציונלי: מדיה אחרת משמשת בדרך כלל למיני Streptomyces , כגון R2YE ומדיה מינימלית.
2. דגרו צלחות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס.
3. החזר צלחות על ידי בחירת מושבה אחת כל 4-6 ימים. ככל שהמושבות מזדקנות, הן הופכות מועדות למוטציות אקראיות.
3. השווה והקלט מראה חזותי
1. שימו לב למורפולוגיה של המושבה עבור כל מוטאנט בהשוואה לזן האב מסוג הבר לאחר פסים של כל הזנים כמו בשלב 2. השוו את הבודד החדש לזה של מין שנחקר היטב, כגון S. coelicolor או S. venezuelae, כאשר אפיינו מינים חדשים של Streptomyces . שימו לב למאפיינים (איור 1) כגון צורה בסיסית, פני השטח של המושבה (מטושטש, קירח, מקומט וכו'), אטימות, גובה ופיגמנטציה (הבחין בין תפטיר וגטטיבי, תפטיר אווירי ו/או תווך מסביב).
2. סמן צלחת אגר MS ופס זנים מסוג פרא ומוטנטי בדפוסי טריז (איור 1). היזהר שאף זן לא ייגע בזן אחר כדי למנוע זיהום צולב. שימו לב לתאריך ולשעה שבהם הזנים מפוספסים על הצלחת. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס.
3. מניחים צלחות פטרי מגודלות על נייר צבעוני או לבן כדי להומוגניזציה של הרקע. כתוב על הנייר את שם הזן, התאריך, טמפרטורת הדגירה והשעה מהפסים של הצלחת הראשונה. צלם תמונות דיגיטליות של הלוחית עם המידע האחרון כתוב על רקע הנייר כך שהבלבול ימוזער.
הערה: ניתן לחתוך את הכתב מהתצלום במועד מאוחר יותר אם הוא ישמש להכנת דמות.
