מיקרוסקופ ניגוד פאזה להערכת מוטציות התפתחותיות בסטרפטומיצס

תקציר

מקור: בנט, ג'יי א. ואח'. הערכה חזותית ומיקרוסקופית של מוטציות התפתחותיות של Streptomyces . J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ ניגודיות פאזה כדי לבחון הבדלים פנוטיפיים בין Streptomyces coelicolor מסוג בר למוטנטי. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בהכנה והדמיה של חוטי אוויר לאיתור פגמים התפתחותיים בהיווצרות נבגים.

פרוטוקול

1. בצע מיקרוסקופ ניגודיות פאזה

1. עקר פינצטה על ידי שטיפה ב-70% אתנול ולאחר מכן מעבר דרך להבת מבער בונסן כדי לאדות את האתנול. מניחים להתקרר.
2. עקרו את הכיסויים על ידי שטיפתם ב-70% אתנול ולאחר מכן אפשרו להם להתייבש בצלחת פטרי סטרילית.
3. הכן מעלית כיסוי של גידול החיידקים לבדיקה.
   1. הרם כיסוי סטרילי עם פינצטה סטרילית והנח את הכיסוי על צלחת אגר מקמח סויה מניטול (MS) שבה צמיחת חיידקי Streptomyces coelicolor צפופה. לחץ על גב הכיסויההחלקה בעדינות עם פינצטה כדי להבטיח העברה מספקת של נבגי חיידקים ותפטיר אווירי.
4. הרם את הכיסוי מהצלחת והנח אותו כך שהצד עם חומר התא פונה לכיוון פני השטח ש....

תוצאות

איור 1: מיקרוגרפים עם ניגודיות פאזה המראים נימה אווירית מייצגת עבור זנים מוטנטיים לבנים של Streptomyces coelicolor המכילים מוטציות אקראיות של החדרת טרנספוזון. (A) מוצג חוט אווירי מייצג .......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
50% גליצרול	סיגמא-אולדריץ'	G5516
שמן טבילה (סוג DF)	קרג'יל	16482
מים סטריליים	GeneMate	G-3250-1L
100% אתנול	סיגמא-אולדריץ'	E7023
קמח סויה	הטחנה האדומה של בוב	1516C164
די-מניטול	סיגמא-אולדריץ'	M4125-1 ק"ג
אגר	סיגמא-אולדריץ'	A1296-1 ק"ג
גליצרול 100%	VWR אמרסקו מדעי החיים	0854-1L
צלחות פטרי	סיגמא-אולדריץ'	P5856-500EA
תעודות כיסוי #1.5	תומאס סיינטיפיק	64-0721
שקופיות	קרוליינה	63-2010
מיקרוסקופ ניגודיות פאזה	אולימפוס	BX40
מלקחיים	קרולינה ביולוגית	624504
מבער בונסן	קרולינה ביולוגית	706706
לק שקוף	OPI	22001009000
מצלמה למיקרוסקופ	אולימפוס	DP72
כפפות לבדיקת ניטריל (Med)	ביו אקסל	71011002