הקמת תרבית בינארית של חיידקי סכרי עם חיידקים מארחים

תקציר

מקור: Collins, A. J., et al., הקמת תרביות בינאריות יציבות של חיידקי סכריות סימביוטיים מחלל הפה. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים את ההקמה והתחזוקה של תרבית בינארית של חיידקי סכרי והחיידק המארח שלהם על ידי דגירה משותפת שלהם ברצף במדיום גידול ספציפי למארח.

פרוטוקול

1. לרכז תאי סקאריבקטריה על ידי צנטריפוגה
   1. צור סימן כיוון על הצינור והמכסה, והנח את הצינור בצנטריפוגה מהירה עם הסימן בצד העליון. הכדור שנוצר מצנטריפוגה בדרך כלל בלתי נראה. הסימון יעזור לקבוע היכן ממוקמת הגלולה של תאי Saccharibacteria כאשר מתבצעת צנטריפוגה ומוציאים את הצינור מהצנטריפוגה.
   2. צנטריפוגה את הדגימות ב-60,000 x גרם למשך שעה אחת ב-4 מעלות צלזיוס.
      הערה: כוח וזמן אלה מספיקים כדי לגלול את כל תאי ה-Saccharibacteria. עם זאת, ניתן לגלול לפחות חלקית את תאי הסכריקה על ידי צנטריפוגה למשך 20 דקות בלבד ב-20,000 x גרם.
   3. הסר בזהירות את הצינורות מהצנטריפוגה. שופכים את הנוזל מהצינור, שומרים את הגלולה בצד העליון של הצינור.
   4. השעו מחדש את הגלולה הבלתי נראית בדרך כלל ב-1-2 מ"ל של מאגר MRD (מדלל התאוששות מקסימלית) על ידי מערבולת נמרצת.

2. להדביק תרביות מארח עם תסנין מועשר בסכרובקטריה

1. הכן צינורות תרבית על ידי ציטוט של 2 מ"ל של מצע גידול מתאים (למשל, TSBY (מרק סויה טריפטי עם 0.1% תמצית שמרים), BHI (עירוי לב מוח) וכו') לתוך צינורות.
2. הוסף 200 מיקרוליטר מתרבית הלילה של אורגניזמים מארחים לכל צינור. הוסף 100-200 מיקרוליטר של דגימה תלויה ומסוננת לכל צינור.
3. דגירה של דגימות משולבות בהתאם לאורגניזם המארח (למשל, 37 מעלות צלזיוס, באווירה אירובית עבור Arachnia propionica).
4. העבירו את התאים כל יומיים-שלושה על ידי העברת 200 מיקרוליטר של תרבית בינארית ל-2 מ"ל של מצע גידול טרי בצינור חדש. אם נראה שהתרביות המועברות אינן מראות צמיחה (כלומר, העכירות/הצפיפות האופטית של התרבית אינה גדלה לאחר המעבר למדיה טרייה), חיידקי הסכרי יכולים להכריע או להרוג את כל האורגניזמים המארחים. כדי לתקן זאת, הוסף 200 מיקרוליטר של תרבית מארח לא נגועה בעת מעבר התאים. חזור על הפעולה לפחות 5 קטעים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Brain Heart Infusion Broth (אבקה מיובשת)	בקטון-דיקינסון	211059	או אמצעי גידול אחרים המתאימים לאורגניזמים יעד
רוטור צנטריפוגה 70-Ti	בקמן קולטר	337922
2 תא כפפות InVitro שליטה	Coy Laoratories	31615	במידת הצורך לאורגניזמים מיקרואירוביים
אופטימה L-100 XP צנטריפוגה במהירות גבוהה	בקמן קולטר	8043-30-1124
P-1000 מיקרו פיפטה	גילסון	F123601G
P-200 מיקרו פיפטה	גילסון	F123602G
PBS (מי מלח חוצץ פוספט)	פישר סיינטיפיק	BP399500
פפטון	פישר סיינטיפיק	BP1420-500
קצות פיפטות - 1000 מיקרוליטר	פישר סיינטיפיק	02-717-166
קצות פיפטות - 200 מיקרוליטר	פישר סיינטיפיק	02-717-165
צינורות צנטריפוגה חרוטיים עם מכסה בורג 15 מ"ל	בז	352096	או צינור אחר המתאים לתרבית חיידקים
צינורות צנטריפוגה פוליקרבונט עבים 25 x 89 מ"מ (קיבולת 26.3 מ"ל) עם כובעים	בקמן קולטר	355618
צלחות אגר דם סויה טריפטיות	שירותי מעבדה נורת'איסט	עמ' 1100	או צלחת אגר אחרת המספיקה לגידול אורגניזמים מארחים
ציר סויה טריפטי (אבקה מיובשת)	בקטון-דיקינסון	211825	או אמצעי גידול אחרים המתאימים לאורגניזמים יעד
תמצית שמרים	פישר סיינטיפיק	BP1422-500