ניתוח מיקרוסקופי של גידול חיידקים תחת לחץ באמצעות תאים מיקרופלואידיים

תקציר

מקור: Cayron, J., et al. ניתוח רב-ממדי של צמיחת חיידקים תחת טיפולי לחץ. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים כיצד להכין ולהשתמש בצלחת מיקרופלואידית להדמיית תאי חיידקים בתנאי עקה. הוא מתאר את תהליך החדרת תרבית חיידקים ומדיום אנטיביוטי מעורר מתח, ואחריו העמסת תאים והתקנה מיקרוסקופית. לאחר מכן משתמשים בהדמיית זמן-lapse במצב ניגודיות פאזה כדי לצפות בהתפתחות של תאים מוארכים וחוטיים עם תכולת DNA מוגברת עקב חלוקת תאים מעוכבת.

פרוטוקול

1. מיקרופלואידיקה הדמיית מיקרוסקופיה בהילוך מהיר
   1. הסר את תמיסת השימור מהצלחת המיקרופלואידית והחלף אותה במדיום טרי שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס, כמתואר במדריך למשתמש של התוכנה המיקרופלואידית.
   2. אטום את הצלחת המיקרופלואידית למערכת הסעפת ולחץ על כפתור ההתחלה.
   3. הנח את הצלחת המיקרופלואידית עם מערכת הסעפת על המיקרוסקופ stage וחמם מראש ב-37 מעלות צלזיוס למשך ~2 שעות לפני תחילת רכישת המיקרוסקופיה.
      הערה: שלב חימום מוקדם זה הוא קריטי כדי למנוע התרחבות של תא המיקרופלואידי, מה שישנה את מיקוד המיקרוסקופ במהלך ניסוי ה-time-lapse ויפגע ברכישת התמונה.
   4. אטום את הצלחת המיקרופלואידית. החלף את המדיום מבאר 8 ב-....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מערכת מיקרופלואידית של CellASIC ONIX	מרק מיליפור	CAX2-S0000	מערכת מיקרופלואידית
סלאסיק ONIX2 FG	מרק מיליפור	ONIX2 1.0.1	תוכנה מיקרופלואידית
סעפת CellASIC ONIX2 בסיסית	מרק מיליפור	CAX2-MBC20	מערכת סעפת
זן E. coli הנושא החדרה כרומוזומלית לאיחוי hupA-mCherry			נוצר על ידי התמרת P1 של hupA-mCherry ב-E. coli MG1655
צלחות מיקרופלואידיות CellASIC ONIX	מרק מיליפור	B04A-03-5PK	צלחת למערכת מיקרופלואידית
מיקרוסקופ ניקון ליקוי חמה Ti	ניקון		מיקרוסקופ פלואורסצנטי
MOPS EZ Rich Defined Medium (RDM)	טקנובה	M2105	מדיום עשיר בגדילה, תערובת MOPS 10x, 0,132 M K₂HPO₄, 10x AGCU, 5x תוסף EZ, 20% גלוקוז. מסוננים ב- 0.22 μm