הדמיה של תנועתיות חיידקים באמצעות מדיום חצי מוצק בתוספת צבע חיזור

תקציר

מקור: Chu, W., and Zhuang, X. הדמיית תנועתיות חיידקים על סמך תגובת צבע. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים בדיקת אגר חצי מוצקה מבוססת צבע חיזור להערכת תנועתיות חיידקים על ידי הבחנה חזותית בין זנים נעים ולא תנועתיים.

פרוטוקול

זני חיידקים

הערה: שמונים זנים בודדו מהסביבה המימית וזוהו באמצעות מכשיר אוטומטי לזיהוי חיידקים (ראה טבלת החומרים), כולל Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae ו-Aeromonas hydrophila (טבלה 1). Staphylococcus aureus (ראה טבלת החומרים) שימש כבקרה שלילית לא תנועתית; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ו-Salmonella typhimurium (ראה טבלת החומרים) שימשו כזני ביקורת חיוביים.

1. זהה זני חיידקי בדיקה שישמשו לניתוח תנועתיות.
2. כלול בקרות שליליות לא תנועתיות וזני בקרה חיוביים בתנועה.

תצפית על תנועתיות חיידקים משופרת TTC

1. בחר מושבות בודדות של חיידקי בדיקה מצלחות אגר וחסן אותן לתוך המדיה המוצקה למחצה עם TTC (2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) על ידי ניקובם במחטי חיסון.
2. תרבית את הצינורות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחממה למשך 24-48 שעות כדי לצפות בתוצאות.
3. שימו לב למצב הגידול: אפיינו את החיידקים כלא תנועתיים (-) אם רק קו הניקוב אדום. אפיינו את החיידקים כתנועתיים (+) אם הצבע האדום מתפשט קלות החוצה לאורך קו הניקוב.

טבלה 1: השוואה בין תנועתיות חיידקים.

זן		בינוני חצי מוצק עם 0.4% אגר		בינוני חצי מוצק עם 0.4% אגר ו-0.005% TTC
		24 שעות	48 שעות	24 שעות	48 שעות
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
אי קולי ATCC25922		+	+	+	+
ס. טיפימוריום ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
אי קולי (15)		12	14	13	14
סלמונלה (8)		7	8	8	8
א. הידרופילה (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
פ. ארוגינוזה (24)		18	20	22	23
ק. דלקת ריאות (5)		-5	-5	-5	-5
מספרים מציינים את מספר הזנים החיוביים (+) והכתמים השליליים (-).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
בקטו אגר	דיפקו
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	שליטה חיובית
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	שליטה חיובית
סטפילוקוקוס זהוב	ATCC	ATCC25923	שליטה שלילית שאינה נעה
טריפטוז	אוקסואיד
TTC (2,3,5-טריפניל-טטרזוליום כלוריד)	סיגמא	298-96-4
VITEK 2 מערכת זיהוי מיקרוביאלית אוטומטית	ביו מריו