Method Article

דפוס מיקרופלואידית ומעקב מבוסס פלואורסצנטי של צמיחת חיידקים חד-תאיים

October 30th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Pioli, R., et al., דפוס של מיקרואורגניזמים ומיקרו-חלקיקים באמצעות הרכבה בסיוע נימיות רציפה. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים את השיטה של לכידת תאי Escherichia coli (E. coli) בודדים מתויגים פלואורסצנטית במלכודות מיקרופלואידיות באמצעות תרחיף נטול פחמן וזרימה מבוקרת, ואחריו תוספת חומרים מזינים כדי לעורר צמיחה והדמיה פלואורסצנטית של מיקרו-מושבות.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. דפוס חיידקים

  1. יום אחד לפני הניסוי, גדל אוכלוסייה של Escherichia coli (זן MG1655 prpsM-GFP). חסנו את התרבית ישירות מהמלאי הקפוא וגידלו למשך הלילה במשך 20 שעות במדיום מרק ליזוגני (LB) בחממת שייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. הוסיפו 50 מיקרוגרם/מ"ל של קנמיצין כדי שהתאים ישמרו על הפלסמיד prpsM-GFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק).
  2. ביום הניסוי, הגדירו את אינקובטור הקופסה (איור 1A) ל-37 מעלות צלזיוס כמה שעות לפני הניסוי כדי להבטיח טמפרטורה אחידה ויציבה לפני שמתחילים. לאחר מכן, הגדירו את משאבת המזרק ואת לוחית הזכוכית המחוממת על במת המיקרוסקופ (איור 1B,C), וקבעו את הטמפרטורה באותה טמפרטורה כמו חממת הקופסה.
    הערה: ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

איור 1: סכמטי של הפלטפורמה עבור הרכבה בסיוע נימי רציף בתעלה מיקרופלואידית. (א) אינקובטור קופסה. חממת הקופסה שומרת על טמפרטורה אחידה וקבועה (כאן, 30 מעלות צלזיוס) בתוך התעלה המיקרופלואידית. (ב) מזרק טעון בתרחיף נוזלי. המזרק נשלט על ידי משאבת .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
מזרק BD 10 מ"ל (Luer-Lock)ב.ד.300912משמש לשטיפת מרק ליזוגני טרי לתעלה המיקרופלואידית
חממת קופסאותשירותי הדמיית חיים משמש להבטחת טמפרטורה אחידה וקבועה בתעלה
צנטריפוגהאפנדורףר5424רמשמש להחלפת מדיית הלילה במדיה מינימלית טרייה
בקבוקון צנטריפוגהאפנדורף301200861.5 מ"ל
בסיס CETONI 120CETONI GmbH משאבת מזרק
H401-T-בקראוקולאב בקר צלחת הזכוכית המחוממת
H601-ניקון-TS2R-זכוכיתאוקולאב צלחת זכוכית מחוממת
מזרקי אינסולין, U 100, עם לוארקודן מדיקל ApSCODA621640מזרק 1 מ"ל המשמש למשיכת המתלה הנוזלי במהלך תהליך הדפוס
מרק LB, מילר (לוריא-ברטני)פישר סיינטיפיק244610מרק ליזוגני נשטף לתעלה המיקרופלואידית
צינורות העברה MasterflexמאסטרפלקסHV-06419-05מזהה 0.020 אינץ', 0.06 אינץ' OD
מגבים (פי 10)טקנובהM2101מדולל פי עשרה במי milliQ ומשמש להחלפת מדיום הלילה
ניקון אקליפס Ti2מכשירי ניקון מיקרוסקופ
אשלגן פוספט דו-בסיסיסיגמא אולדריץ'עמ' 3786נוסף ל-MOPS 1x
טווין 20סיגמא אולדריץ'עמ' 1379משמש להבטחת זווית מגע נסיגה אופטימלית במהלך תהליך הדפוס

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microfluidic PatterningBacterial Growth TrackingFluorescence MicroscopyCapillary AssemblySingle Cell AnalysisMicrofluidic TrapsCarbon Free BufferNutrient Induced GrowthTime Lapse ImagingE coli Culture

Related Articles