ויזואליזציה של אינטראקציות חיידקיות חד-תאיות

תקציר

מקור: Yarringto, K. D., et al. הדמיה קינטית של אינטראקציות חיידקיות בין מינים בודדים. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את הכנת מערכת קוקולטורה באמצעות חיידקים נעים ולא נעים מתחת לכרית אגרוז להדמיית תאים חיים. הוא מראה כיצד חיידקים נעים מזהים מושכים כימיים ופולשים למושבות לא תנועתיות, וחושפים אינטראקציות חיידקיות.

פרוטוקול

1. הכנת תאי חיידקים ורפידות חיסון

1. מדוד את הצפיפות האופטית, OD₆₀₀, של כל תת-תרבות ודלל את Pseudomonas aeruginosa ל-OD₆₀₀ = 0.03 ואת Staphylococcus aureus ל-OD₆₀₀ = 0.10 ב-M8T (מינימלי בינוני 8 + טריפטון) שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס. מערבבים P. aeruginosa ו-S. aureus ביחס של 1:1 ומערבולת.
   הערה: אם זנים דורשים אנטיביוטיקה, ניתן להוסיף אותם ללילה ולתת-תרבית, אך אין להוסיף אותם בעת ערבוב מינים להדמיה אם הם משפיעים על המינים האחרים בקוקולטורה. יציבות הפלסמיד והשפעות האנטיביוטיקה על כל המינים בקוקולטורה יצטרכו להיקבע עבור כל אורגניזם/פלסמיד בשימוש.
2. פיפטה 1 מיקרוליטר של קוקולטורה באופן שווה על פני החלק התחתון של צלחת כיסוי זכוכית סטרילית בגודל 35 מ"מ שחוממה מראש.
3. מוציאים את גזרת הסיליקון מהתבנית בעזרת פינצטה סטרילית.
4. מוציאים את הכרית מהצלחת בעזרת מרית סטרילית.
   1. החלק את המרית הכפופה מעט מתחת לקצה הכרית תוך החזקת התבנית הפוכה כדי להפיל אותה על מכסה צלחת פטרי סטרילי.
      הערה: אל תכריח את הכרית החוצה, אחרת היא תיקרע. עקוב אחר איזה צד של המשטח הוא התחתון.
5. העבירו את הכרית לכלי עם תאי החיידקים, עם הצד התחתון כלפי מטה, על ידי החלקת המרית בזווית של 90 מעלות מתחת לרפידה והנחתה על גבי הכיסוי המחוסן. השתמש במרית בזווית של 90° כדי לגרום לכרית להצמיד את הכיסוי וללחוץ בעדינות החוצה את בועות האוויר.
6. הסר עודפי לחות ממגבונים לחים והניח אותם סביב קצה המנה, וודא שהם לא נוגעים בכרית. הדגימה מוכנה כעת להדמיה.

חומרים