הכנת תרבית סטרפטוקוקוס מיטיס למחקרי אינטראקציה בין מארח-פתוגן

תקציר

מקור: Naji, A., et al. חקר מתח חמצוני הנגרם על ידי סטרפטוקוקוס מקבוצת Mitis ב- Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים את השיטה לתרבית סטרפטוקוקוס מיטיס בתנאים מיקרואירופיליים באמצעות תמצית שמרים טוד-יואיט, או מדיום אגר THY, להכנת תרביות חיידקים למחקרי אינטראקציה בין מארח-פתוגן.

פרוטוקול

1. הכנת סטרפטוקוקוס מקבוצת Mitis לזיהום

1. פס זנים רצויים של סטרפטוקוק על אגר THY בגודל 100 מ"מ על 15 מ"מ (תמצית שמרים של טוד-יואיט) (אם הצלחות אוחסנו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, חממו מראש את הצלחות ל -37 מעלות צלזיוס לפני פסים של הזנים המתאימים), ואז דגרו את הצלחות ב -37 מעלות צלזיוס למשך הלילה (~ 18 שעות) בצנצנת נרות המספקת סביבה מיקרואירופילית לצמיחת הסטרפטוקוק (ניתן לאחסן את הצלחות המפוספסות למשך שבוע ב -4 מעלות C).
2. כדי להפיץ מבודדים קליניים של סטרפטוקוקים, השתמש באגר דם סויה טריפטית. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בצנצנת נרות למשך הלילה (~18 שעות).
3. למחרת, הוציאו את הצלחות מצנצנת הנרות ובחרו מושבות מבודדות באמצעות לולאה סטרילית. יש לחסן צינורות חרוטיים סטריליים בנפח 15 מ"ל המכילים 2 מ"ל של מרק THY. כדי להפיץ מבודדים קליניים של סטרפטוקוקים, יש להשלים את מרק THY עם 5% v/v של דם כבשים. סגור היטב את המכסים ודגר את הצינורות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים סטטיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מרק BD בקטו טוד יואיט	פישר סיינטיפיק	DF0492-17-6
תמצית שמרים	פישר סיינטיפיק	BP1422-500
פיפטות סרולוגיות חד פעמיות מפוליסטירן 10 מ"ל	פישר סיינטיפיק	07-200-574
פיפטות סרולוגיות חד פעמיות מפוליסטירן 25 מ"ל	פישר סיינטיפיק	07-200-575
פלקון בקטריולוגי צלחות פטרי עם מכסה (35 מ"מ על 10 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	08-757-100א
צלחת פטרי עם מכסה שקוף (60 מ"מ על 15 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	FB0875713A
צלחות פטרי עם מכסה שקוף (100 מ"מ על 15 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	FB0875712
S. mitis ATCC 49456
אגר