תרבית המופילוס אינפלואנזה שאינו ניתן לסוג

תקציר

מקור: Venuprasad, K. et al., מתן תוך-קנה של המופילוס אינפלואנזה במודלים של עכברים לחקר דלקת בדרכי הנשימה. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את התרבות של המופילוס אינפלואנזה שאינו ניתן לסוג והכנת חיסון מתוקנן במינון למחקרי קולוניזציה או זיהום במורד הזרם.

פרוטוקול

1. גידול המופילוס אינפלואנזה (NTHi) והכנת החיסון

1. צלחת NTHi על צלחת אגר שוקולד ושמור את הצלחת הפוכה בחממת CO₂ לחה למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO₂. למחרת, תרבית את החיידקים במרק עירוי לב במוח. לאחר מכן, הוסיפו 1 מ"ל מהמרק לצינור סטרילי של 1.5 מ"ל.
2. צנטריפוגה ב-4,000 x גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה ב-1 מ"ל של תמיסת מלח סטרילית 1x פוספט (PBS). חזור על שלב זה פעם אחת.
3. העבירו 100 מיקרוליטר מהתמיסה המושעה מחדש ל-900 מיקרוליטר של 1x PBS ומדדו את הספיגה של התרבית המדוללת באורך גל של 600 ננומטר בספקטרופוטומטר.
4. קבע את הכדאיות והיחידות היוצרות מושבה (CFUs) של החיסון על ידי תרבית דילול סדרתי של 1:10 על צלחות אגר שוקולד ודגירה למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO₂.
5. בהתבסס על הכדאיות וה-CFUs שנקבעו מהשלב הקודם, התאימו את החיסון לריכוז סופי של 20 x 10⁶ CFU/ml.

חומרים