טיהור שיפוע צפיפות של פלסטוגלובולים ציאנובקטריאליים

במאמר זה

תקציר

מקור: Shivaiah, K., et al. בידוד טיפות ליפידים של פלסטוגלובול מרקמת עלי הצמח וציאנובקטריה. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מדגים את הבידוד של פלסטוגלובולות מציאנובקטריה באמצעות צנטריפוגה של שיפוע צפיפות סוכרוז, מדגיש את אופיים העשיר בשומנים ובצפיפות נמוכה ומבטיח את שימורם המבני לניתוח במורד הזרם.

פרוטוקול

1. קציר פלסטוגלובולות טהורות

עיבוד ציאנובקטריה
1. לייצר שיפוע סוכרוז בארבעה צינורות אולטרה-צנטריפוגה של 2.5 מ"ל בשכבות ראשונות עם 500 מיקרוליטר של הפלסטגלובולות הגולמיות משלב 1.3 מעורבב עם 750 מיקרוליטר של בינוני R 0.7, ואז כיסוי עם 750 מיקרוליטר של בינוני R 0.2 (טבלה 1)
2. צנטריפוגה את שיפוע הסוכרוז ב-150,000 x גרם למשך 90 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. אסוף את הפלסטגלובולות הטהורות (איור 1C) עם מזרק ומחט 22 גרם מהשלב העליון של שיפוע הסוכרוז והעביר לצינור של 1.5 מ"ל.
3. הקפיא את הפלסטגלובולות הטהורות והקפיא בזק בחנקן נוזלי. יש לאחסן ישירות בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס או ליופיליזציה לאבקה יבשה.

טבלה 1: מתכוני חיץ לבידוד פלסטוגלובול מציאנובקטריה.

בינוני ר	50 מ"מ hepes-koh (pH 8.0)
בינוני ר	5 מ"מ MgCl₂
בינוני R 0.2	50 מ"מ hepes-koh (pH 8.0)
	5 מ"מ MgCl₂
	0.2 מ סוכרוז
בינוני R 0.7	50 מ"מ hepes-koh (pH 8.0)
	5 מ"מ MgCl₂
	0.7 מ סוכרוז

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1: בידוד ואימונובלוטינג של פלסטוגלובולים ותילקואידים. (A) דגימת פלסטוגלובול מטוהרת מייצגת מ-Z. mays לפני מיצוי משיפוע הסוכרוז. (B) דגימת פלסטוגלובול גולמית מייצגת מ-E. nindensis מיובש לפני...