הכנת תרבית בוצה אנאירובית בתנאים נטולי חמצן

תקציר

מקור: Wagner, A. O., et al., הכנה בינונית לגידול מיקרואורגניזמים בתנאים אנאירוביים/אנוקסיים למהדרין. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את ההכנה והחיסון של תרביות אנאירוביות באמצעות בוצה נטולת חמצן בתנאים מבוקרים ונטולי חמצן.

פרוטוקול

חיסון המדיום

1. הכן חיסון מהמעכל האנאירובי.
   1. מוסיפים 400 מ"ל מים מזוקקים לבקבוק ומביאים לרתיחה.
   2. קרר אותו (< 30 מעלות צלזיוס) תוך שטיפה קבועה של מרווח הראש עם N₂.
   3. הוסף כ -100 גרם בוצה שמקורה במעכל אנאירובי.
      הערה: הימנע ממגע מוגזם של בוצה עם חמצן.
   4. רשום את המסה המדויקת של הבוצה שנוספה לקביעה מדויקת של הדילול.
   5. החלף את מרווח הראש של הבקבוק ב-N₂ וסגור אותו עם מחיצת גומי בוטיל.
   6. יש לנער את הבקבוק למשך 30 דקות ב-120 סל"ד.
2. הסר 5 מ"ל חיסון באמצעות מזרק + צינורית והזריק אותו לצלוחיות הסרום המוכנות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צלוחיות תרבות (120 מ"ל, N20)	Ochs, גרמניה	102046
מחיצות גומי בוטיל (N20)	Ochs, גרמניה	102049
מכסי אלומיניום (N20)	Ochs, גרמניה	102050
גז N₂	Messer, אוסטריה		טוהר 5.0
מזרקים + צינוריות	מגוון
קרימפר	Ochs, גרמניה	102051
מבחן מלחץ	Ochs, גרמניה	102052
GC2010	שימדזו