ניתוחים היסטולוגיים וההמטולוגיים להערכת השפעות Bacillus subtilis בעכברים תחת לחץ חום

תקציר

מקור: סורוקולובה, א., ואחרים. מניעת תופעות לוואי מלחץ חום בעכברים על ידי זן Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

הסרטון מציג ניתוחים היסטולוגיים ומיקרוסקופיים של דם המשמשים להערכת ההשפעות המגנות של Bacillus subtilis בעכברים החשופים ללחץ חום.

פרוטוקול

1. ניתוח היסטולוגי

1. הסר דגימות מעי דק מכל עכברוש ניסיוני באמצעות הליך כירורגי. לקבע דגימות ב-Bouin's Fixative, להטמיע בפראפין, להכין חתכים של 6 מיקרון ולצבוע מקטעים בהמטוקסילין ואאוזין באמצעות פרוצדורות סטנדרטיות.
2. השתמש במערכת מיקרוסקופ ברזולוציה גבוהה למדידת גובה סילי המעי ועובי הריר הכולל בכל דגימה (הגדלה של 100X). נתח 4 דגימות מכל חולדה ובצע לפחות עשרים מדידות בכל דגימה. Express תוצאות במיקרומטרים.

2. מיקרוסקופיית אור ברזולוציה גבוהה של דם

1. השתמשו בפלטפורמת בידוד רטט כבסיס למערכת המיקרוסקופ ובמצלמת וידאו ומחשב להקלטת התמונות החיות. כיילן תמונות בדיקה באמצעות שקופית ריצ'רדסון.
2. הניחו 7 מיקרוליטר דם טרי מכל חולדה על שקף זכוכית, כיסוי כיסוי, צילומים והקלטת עשר פריימים של 72 × 53.3^{מיקרון 2} בכל דגימה (הגדלה 1,700x).
3. מדדו את ריכוז הוזיקולות באמצעות תוכנה שמספקת תמונות אופטיות ברזולוציה גבוהה במבט ישיר בזמן אמת. בדקו לפחות 20 פריימים לכל תנאי ניסוי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
סליין עם בופר זרחן (PBS)	סיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי	P4417
הקיבעון של בואן	מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית, האטפילד, פנסילבניה, ארה"ב	15990
שקופית ניסוי ריצ'רדסון	מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית, האטפילד, פנסילבניה, ארה"ב	80303
מצלמת וידאו Sony DXC-33	סוני
מערכת אופטית של מיקרוסקופ אור	CitoViva Technology Inc., אובורן, אלבמה
תוכנת Image-Pro Plus	מדיה סייברנטיקס, מרילנד, ארה"ב