יצירת תרביות חיידקיות טהורות במדיום נוזלי

תקציר

מקור: ברומפילד, ק. ד. ואחרים, טכניקות מעבדה המשמשות לשימור והבחנה של ביוטיפים של ויבריו כולרה מבודדים קליניים וסביבתיים. J. Vis. Exp. (2017)

הסרטון הזה מדגים את צמיחת תרביות החיידקים בתווך נוזלי. ניעור מקדם אוורור ומפיץ את החומרים המזינים באופן שווה, תומך בצמיחה מעריכית ויוצר תלייה אחידה ופעילה מטבולית, המתאימה ליישומים במורד הזרם.

פרוטוקול

1. תחזוקה וצמיחת זני ויבריו כולרה

1. הכנה ושימוש בתרביות ציר קפואות
   1. פלט של 1.8 מ"ל תרבית נוזלית ללילה למשך 2 דקות באמצעות צנטריפוגה (≥8,600 x גרם) בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי בנפח 2 מ"ל, הסרת סופרנאנט, והשיה מחדש את כדור התא ב-900 מיקרוליטר של מרק Luria-Bertani (LB) טרי באמצעות פיפטינג.
   2. הוסיפו 900 מיקרוליטר גליצרול סטרילי של 60% (v/v) לתרבות וערבבו על ידי מערבוב.
   3. העבר את התערובת לצינור קריוגני סטרילי בנפח 2 מ"ל ואחסן ללא הגבלת זמן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס.
   4. לשימוש, הסר כמות קטנה של ציר קפוא באמצעות לולאת חיסון סטרילית ופס למושבות בודדות על לוחות אגר LB. החזר מיד את המלאי הקפוא לטמפרטורה של מינוס 80°C לאחר השימוש כדי למנוע הפשרת תרביות לחלוטין. לוחות הדגירה עם צד המכסה כלפי מטה למשך 12 עד 16 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
2. גדילה של תרביות לילה בתווך נוזלי
   1. רצף למושבות בודדות (לפי סעיף 1.1.4) ממלאי קפוא על לוחות אגר LB. לוחות הדגירה עם צד המכסה כלפי מטה למשך 12 עד 16 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
   2. החסן 4 מ"ל מרק נוזלי LB בצינור תרבית סטרילי בנפח 10 מ"ל עם מושבה אחת על ידי נגיעה במשטח המושבה עם מקל אפליקטור סטרילי והעברת המושבה למרק הנוזלי.
   3. דגרו עם אוורור בתנור שייקר במהירות של 225 סיבובים לדקה (סל"ד) למשך 12 עד 16 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
60% גליצרול	קלביוכימיה	356352	http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade---CAS-56-81-5---Calbiochem,EMD_BIO-356352
אגר	בקטו, דיקינסון ושות'.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
HCl	פישר סיינטיפיק	A144-212	קורוזיבי; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID
לה לופ	Decon Labs Inc.	MP190-25	http://deconlabs.com/products/leloop/
לה סטאב	Decon Labs Inc.	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
NaCl	פישר סיינטיפיק	S271-10	https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID
צלחות פטרי (100 מ"מ x 15 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	FB0875712	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712
טריפטון	בקטו, דיקינסון ושות'.	211705	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch
תמצית שמרים	בקטו, דיקינסון ושות'.	212750	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch