מבחן תנועתיות להשוואת זני ויבריו כולרה באמצעות טריפנילטרזוליום כלוריד

תקציר

מקור: ברומפילד, ק. ד. ואחרים. טכניקות מעבדה המשמשות לשימור והבחנה בין ביוטיפים של ויבריו כולרה לבידוד קליני וסביבתי. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים מבחן אגר רך המשתמש בכלוריד טריפנילטטרזוליום להערכת והשוואת תנועתיות זני ויבריו כולרה על ידי המחשת פעילות מטבולית דרך יצירת אזור אדום סביב תאים נודדים באופן פעיל.

פרוטוקול

1. מבחן תנועתיות
   1. הכינו תרבית(ים) של זני Vibrio cholerae ללילה בציר נוזלי LB (Luria-Bertani).
   2. גרועה של 1.8 מ"ל מהתרבית הלילית למשך 2 דקות בצנטריפוגה (≥8,600 x גרם) בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי בנפח 2 מ"ל והסרת הסופרנטנט באמצעות פיפטה. החזירו את כדור התא ל-1.8 מ"ל 1x PBS (סליין מפוזר-פוספט) באמצעות פיפטינג.
   3. חזרה על תהליך הכביסה שלוש פעמים, ואחריה השעיה סופית ב-1.8 מ"ל 1x PBS.
   4. חיסון לוחות אגר ניידים על ידי הכנסת דקירה לתוך תרבית הנוזל השטוף ודקירה אנכית לתוך המדיה. בין כל חיסון, חטא את דקירה החוט באמצעות מבער בונזן, וכאשר דוקרים אגר, ודאו שהדקירה לא מתעקמת, שכן זה עלול לשנות את התוצאות.
   5. לוחות הדגירה עם הדחיפה כלפי מעלה למשך 14 עד 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר 14 שעות, יש לעקוב מקרוב אחרי לוחות התנועתיות כדי למנוע התפשטות יתר של תרבויות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אגר	בקטו, דיקינסון ושות'.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
צנטריפוגה על ספסל	אפנדורף	5424	כל צנטריפוגה לצינורות אפנדורף של 1.5 מ"ל
לה סטאב	Decon Labs Inc.	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
מרק LB (מילר)	תרמו/גיבקו	10855021	לצורך תרבית חיידקים סטטית ומדידת OD
צלחות פטרי (150 מ"מ x 15 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID
PBS 1x			לצורך תרבית חיידקים סטטית ומדידת OD
טריפנילטרזוליום כלוריד	אלפא אסאר	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/