הערכת תנועתיות חיידקית באמצעות מכשיר מיקרופלואידי

Abstract

מקור: שיידוויילר, ד., ואחרים. שילוב מכשירים נוזליים עם מיקרוסקופיה וציטומטריית זרימה לחקר הובלה מיקרוביאלית במדיה נקבובית בקנה מידה מרחבי. J. Vis. Exp. (2020).

הסרטון הזה מדגים את השימוש במכשיר מיקרופלואידי לכימות תנועתיות חיידקית באמצעות מטריצה נקבובית המורכבת מעמודים מסודרים באקראי. חיידקים מסומנים פלואורסצנטית מוכנסים למכשיר, מצולמים במיקרוסקופיה כשהם נעים דרך המטריצה הנקבובית אל ערוץ התצפית, ומנותחים ליצירת עקומת פריצת דרך (BTC).

Protocol

1. תנאי תרבית חיידקים

1. בעבודה מתחת למכסה זרימה למינרי, השתמשו ב-100 מיקרוליטר מלאי גליצרול של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) עם תגית Pseudomonas putida KT2440 (1 ×^{10 7} מ"^ל-1, מאוחסן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס) כדי לחליק 5 מ"ל מדיום Luria-Bertani (LB). דגרו ב-30 מעלות צלזיוס תוך כדי ניעור ב-250 סל"ד במהלך הלילה.
2. למחרת, החזירו 100 מיקרוליטר מהתרבית ללילה במדיום של 5 מ"ל ליברליין ודגרו באותם תנאים במשך 5 שעות (שלב מעריכי). דגמו אליקו של 1 מ"ל לתוך צינור של 2 מ"ל, תנו לו להתקרר לטמפרטורת החדר (~15 דקות), ולהשתמש בצנטריפוגה (2300 x גרם למשך 5 דקות).
3. הסר את הסופרנטנט והוסיף 1 מ"ל בופר תנועתיות לכדור. מערבולת לזמן קצ....

Results

איור 1: מכשירים פלואידיים לחקר הובלה מיקרוביאלית במדיה נקבובית (A) איור של מכשיר נוזלי שעובד מפוליאטרון (מתיל מתקרילט (PMMA). המטריצה הנקבובית מושבצת לשכבת הבסיס של המכשיר, והמכסה נסגר באמצעות ברגים. חתך רוחב מראה את סידור העמודים בתוך המכש.......

Materials