הקפאה ארוכת טווח של זנים ציאנובקטיים באמצעות גליצרול או דימתיל סולפוקסיד

תקציר

מקור: ליה-סמית', ד. ג'. ואחרים. יצירת מוטנטים מסומנים וללא סימנים במינים ציאנובקטריאליים מודליים. J. Vis. Exp. (2016)

הסרטון הזה מדגים את שימור ההקפאה של זנים ציאנובקטריאליים על ידי שילוב תסמיני תאים מרוכזים עם גליצרול או DMSO ואחסונם בטמפרטורות נמוכות, מה שמאפשר תחזוקה ארוכת טווח של תרביות ברות קיימא לפוטוסינתזה ומחקרים גנטיים.

פרוטוקול

1. הכנת מדיה תרבותית

1. הכינו את BG11 מדיום
   1. הכינו תמיסות מלאי של 100x BG11, יסודות קורט וקת ברזל (טבלה 1).
   2. הכינו תמיסות נפרדות של מאגר פוספט, נתרן פחמתי (Na_{2CO 3}), בופר N-[Tris(hydroxymethyl)methyl] -2-aminoethanesulfonic acid (TES), וביקרבונט נתרן (NaHCO₃) (טבלה 1).
   3. אוטוקלאב את מלאי הפוספט ו-Na₂CO₃ . סינון סטריליזציה של בופר TES ו-NaHCO₃ עם פילטרים של 0.2 מיקרון.
   4. הכינו את BG11 על ידי שילוב של 976 מ"ל מים, 10 מ"ל של 100 מ"ל BG11, 1 מ"ל של יסודות זעירים, ו-1 מ"ל של ברזל, ואוטוקלאב את התמיסה. לאחר שהתמיסה התקררה לט....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
NaNO₃	סיגמא	S5506
MgSO₄·7H₂O	סיגמא	230391
CaCl₂	סיגמא	C1016
חומצה ציטרית	סיגמא	C0759
Na₂EDTA	פישר	EDT002
H₃BO₃	סיגמא	339067
MnCl₷4H₂O	סיגמא	M3634
ZnSO₄·7H₂O	סיגמא	Z4750
Na₂MoO₄·2H₂O	סיגמא	331058
CuSO₄·5H₂O	סיגמא	209198
Co(NO₃)₂·6H₂O	סיגמא	239267
אמוניום ברזלי ציטראט	סיגמא	F5879
K₂HPO	סיגמא	P3786
Na₂CO₃	פישר	SODC001
TES	סיגמא	T1375
NaHCO₃	פישר	SODH001
HEPES	סיגמא	H3375
ציאנוקובלאמין	סיגמא	47869
Na₂S₂O₃	סיגמא	72049
בקטו אגר	BD	214010
סוקרוזה	פישר	SUC001
צלחת פטרי 90 מ"מ עם אוורור משולש	גריינר	633185
מסנני 0.2 מיקרון	סארטוריוס	16534
בקבוקי חרוט בגודל 100 מ"ל	פיירקס	CON004
Parafilm M 100 מ"מ x 38 מ'	בימיס	FIL003
פולימראז DNA באיכות גבוהה של Phusion	פיוזיון	F-530
אגרוז	מלפורד	MB1200
ערכת טיהור DNA	מוביו	12100-300
אנדונוקלאזים להגבלה	NEB
ליגאז T4	תרמו-סיינטיפיק	EL0011
מרק לוריה ברטאני	Invitrogen	12795-027
MES	סיגמא	M8250
סולפט קאנמיצין	סיגמא	60615
אמפיצילין	סיגמא	A9518
ערכת מיני-פרפ פלסמיד של GeneJET	תרמו-סיינטיפיק	K0503
צינור 14 מ"ל עם תחתית עגולה	BD פלקון	352059
GoTaq G2 Flexi DNA פולימראז	פרומגה	M7805
חרוזי זכוכית 425-600 מיקרון	סיגמא	G8772
גליצרול	סיגמא	G5516
DMSO	סיגמא	D8418
נורות פלואורסצנטיות	גרו-לוקס	69
פוטוביוריאקטור HT מולטטרון	אינפורס