הערכת תפקיד חסינות המארח בזיהום מיקובקטריאלי באמצעות מודל דג זברה

תקציר

מקור: Luukinen, H. ואחרים. מידול שחפת בדג זברה בוגר נגוע במיקובקטריום מרינום . J. Vis. Exp. (2018).

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. זיהום ניסיוני ב-M. marinum בהזרקה תוך-הצפקית

1. הפיפט טיפה של 5 מיקרוליטר של תמיסת חיידק מדולל על חתיכת סרט פאראפילם ומשוך את הטיפה לתוך מחט אינסולין של 30 גרון.
2. השתמשו בדגים פראיים בני 5–8 חודשים ובדגי rag1−/−hu1999 מוטנטיים לניסוי. הרדימו דגי זברה בוגרים במי האקווריום עם אסטר אתיל של 0.02% 3-אמינובנזואיק (pH 7.0). מקם את הצד התחתון של הדג כלפי מעלה בתוך חריץ על פלסטיק מוקצף לח.
   הערה: דגים מוטנטים אינם מסוגלים לעבור רקומבינציה סומטית ולייצר תאי T ו-B פונקציונליים.
3. הזריק את המחט בין סנפירי האגן בזווית של כ-45°. שמור על פתח המחט כלפי מעלה כדי לראות שכל הפתח נמצא בתוך חלל הבטן. הזריק לאט את המתליין החיידקי והוציא בזהירות את המחט.
   הערה: למקרה שהמעקב האדום דולף מהדג בעת ההזרקה, יש להוציא את הדג מהניסוי.
4. מיד לאחר ההזרקה, העבר את הדגים לאקווריום עם מים טריים.
5. קחו דגימות מהמתמחה החיידקי על פלטות 7H10 כל 15 דקות מהאליקו החיידקי בשימוש ודגרו את החיידקים בטמפרטורה של 29 מעלות צלזיוס במשך 5 ימים ואמת את מינון הזיהום על ידי ספירת המושבות על הצלחות.
6. בדקו באופן קבוע את מצב הדג והפכו כל דג עם סימפטומים של הזיהום עם ריכוז של מעל 0.02% של אסטר אתיל 3-אמינובנזואיק (pH 7.0).
   הערה: כ-7% מדגי הזברה הבוגרים שנדבקו ב-34 ±-15 CFU ו-30% מדגי הזברה שנדבקו ב-2029 ±-709 CFU יחוו תסמינים עד 8 שבועות19. התסמינים עשויים לכלול שחייה לא תקינה, חוסר תגובה למגע, נשימות כבדות, בצקת או הישבות נראית לעין.
7. לשמור על דגי הזברה לפי הסטנדרטים המקובלים

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקובקטריום מרינום	אוסף תרבות הטיפוס האמריקאית	ATCC 927
אגר מידלברוק 7H10	BD, תרמו פישר סיינטיפיק	11799042
העשרה ב-OADC של מידלברוק	BD, תרמו פישר סיינטיפיק	11718173
מידלברוק 7H9 בינוני	BD, תרמו פישר סיינטיפיק	11753473
העשרת ADC במידלברוק	BD, תרמו פישר סיינטיפיק	11718173
טבליות מלח עם בופר זרחן (PBS)	סיגמא-אלדריץ'	P4417-50TAB
פנול אדום	סיגמא-אלדריץ'	P3532
מחט 27 G	הנקה סאס וולף	4710004020
מזרק 1 מ"ל	הנקה סאס וולף	4010.200V0
מחט אינסולין Omnican 100 30 גרם	בראון	9151133
אסטר אתיל חומצה 3-אמינובנזואית (pH 7.0)	סיגמא-אלדריץ'	A5040