בדיקת In-Vitro לחקר אינטראקציות מיקרוביאליות בקוואקולטורה

תקציר

מקור: טמקין, מ. איי. ואחרים. בדיקות קו-קולטורה בתפוקה גבוהה לחקירת אינטראקציות מיקרוביאליות. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים בדיקה חוץ-גופית לחקר אינטראקציות מיקרוביאלית בין Corynebacterium propinquum ל-Staphylococcus בקולטורציה משותפת.

פרוטוקול

1. חיסון אורגניזם מטרה

הערה: לאחר דגירה לילה, ודאו שהתרביות עכורות. חלק מהתרביות החיידקיות עשויות להתלקח בתחתית צינור התרבית. סחרור צינורות התרביות לפיזור גושים והעריכה עכירות התרבית.

1. הכינו את צלחת היעד על ידי מילוי כל באר של צלחת ריקה של 12 בארות ב-1.8 מ"ל של מרק עירוי מוח-לב (BHI) ו-200 מיקרוליטר מהתרבית המטרית ללילה.
   הערה: אורגניזם מטרה מתייחס לאורגניזם שסטטוס העיכוב שלו נקבע באמצעות מבחן האינטראקציה של קו-קולטורציה. לניסוי זה, האורגניזמים המטרה הם מיני סטפילוקוקוס שבודדו מדגימות של שטיפות אף אנושיות.
2. פתח והנח חותמת חיסון סטרילית על צלחת המטרה. סובב בעדינות את התרביות בבארות, תוך הקפדה שהתרביות לא יזהמו בארות סמוכות.
3. הרימו את חותמת החיסון וודאו שיש טיפה של תרבית מטרה מדוללת על כל קצה בול.
4. הכינו לוח בקרה מונוקולטורלי על ידי הנחת חותמת החיסון על לוח ביואסה לא מחוסן ונענע בעדינות את הבול כך שטיפה תרבית תחסן כל באר. לאחר הסרת חותמת החיסון, טיפה של תרבית צריכה להיות נראית בבארות של לוח הביואסה.
   1. אם יש בארות שלא מחוסנות בחותמת החיסון עקב רמות מדיה לא אחידות, יש למקם 3 מיקרו ליטר של תרבית מדוללת בלילה בצד ימין של הבארות באמצעות פיפטה.
5. החסן את לוחות הביו-אסה כפי שנעשה לעיל (ראה שלב 1.4.1), אך יישר את החותמת כך שהקצוות יתיישרו עם הצד הימני של לוח 12 הבארות. ודאו שהבול אינו נוגע במושבת החיידקים הקיימת בעת חיסון הבארות.
6. הסר בזהירות את החותמת והחזר אותו ללוח היעד.
7. חזור על החיסון עבור כל לוח ביואסה עד שכל הלוחות מחוסנים.
8. הדגר את לוחות הביו-בדיקה הפוכים בטמפרטורה המתאימה למשך 7 ימים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
לוח תרבית תאים 12 בארים, סטרילי עם מכסה	גריינר ביו-וואן	665 180
אגר, בקטריולוגיה	VWR	J637
מרק עירוי מוח-לב	דוט סיינטיפיק	DSB11000-5000