הערכת התיישבות שורשים של שתילי עגבניות על ידי חיידק פתוגני באמצעות ספירות תאים ברות קיימא

תקציר

מקור: Matthysse, A. G. היצמדות חיידקים למשטחי צמחים שנמדדה במעבדה. J. Vis. Exp., (2018)

סרטון זה מדגים פרוטוקול למדידת התיישבות שורשים של שתילי עגבניות על ידי חיידקים פתוגניים מסוג בר וחסרי תאית. ספירות חיוניות של חיידקים הדביקים היטב מראות הידבקות גבוהה יותר ויצירת מיקרוקולוניות על ידי הזן הפראי, מה שמדגיש את תפקיד התאית ביציבות התיישבות שורשים.

פרוטוקול

1. מדידת הידבקות באמצעות ספירות תאים ברות קיימא

1. קבעו את מספר החיידקים החיים הקשורים לצמחים שגדלו בחול
   1. הסר את הצמח מהמיכל וחולף. כדי להסיר צמחים מהמיכלים, קודם כל הסר חומר איטום מהחלק העליון והתחתון של המיכל. הנח את המיכל מעל חתיכת נייר סטרילי והסר בעדינות את כל החול או האדמה, ושתל כגליל גדול ומחודד על ידי דחיפה עדינה של המיכל על משטח כדי לשחרר את החומר.

1. אם צריך, השתמש במרית או מוט כדי לשחרר את החומר סביב הקצוות שנכנסים דרך תחתית המיכל.

2. כאשר גליל החול או האדמה שמכילה את הצמח פנוי על הנייר, חלקו אותו באמצע כדי לחשוף את שורש הצמח. אם רוצים, קחו דגימות מהחול מקרוב לקצה המיכל וגם קרוב לשורש. זה עשוי להיות שימושי לקביעת התפשטות (והצטברות וצמיחה) של החיידק.
3. מדוד את אורך השורש. הרם את השורש והסר את החול והחיידקים שנדבקים ברפיון לשורש (חומר הריזוספירה) על ידי טבילה בכמות מדודה של מים או בופר וניער עדין שלו. קבעו את ספירת התאים הקיימת של החיידקים בהשעיה המתקבלת על ידי ציפוי על מדיום מתאים כמו אגר לוריה. זה מייצג את מספר החיידקים הקשורים באופן רופף לשורש.
4. הסר את החיידקים הקשורים היטב באמצעות קול וקבע את מספרם.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
זרעים	כל	לא זמין	רשום את מספר הזרעים ואת הזן
חול	פישר סי סנט סיינטיפיק	S25
חול	סיגמא-אלדריץ'	S9887
קונטיינרים	Stuewe & Sons, Inc.	קרני קונוס ריי-ליץ'	קיימים גדלים רבים ושונים שמתאימים לסוג הצמח שתרצו לגדל
סוניקטור באת'	כל חברת אספקה מדעית	לא זמין
פאראפילם	כל חברת אספקה מדעית	לא זמין