מאמר שיטה

הקמת עכבר עובריים גזע עצביים תרבית תאים באמצעות Assay Neurosphere

DOI:

10.3791/2457

⸱

11 בינואר 2011

 ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran , 2Department of Neurosurgery, The University of Florida

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זה פרוטוקול וידאו מדגים את היישום של assay neurosphere לבידוד והרחבת בתאי גזע עצביים מן יואילו הוד מעלתם ganglionic היום עובריים 14-עכבר המוח.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ב mammalians, בתאי גזע מהווה גם מקור של תאים שלא עברו התמיינות לשמור בראשית התא התחדשות רקמות ואיברים שונים במהלך תוחלת החיים של החיה. הם יכולים באופן פוטנציאלי להחליף תאים אובדים בתהליך ההזדקנות או בתהליך של פציעה ומחלה. קיומו של בתאי גזע עצביים (NSCs) תוארה לראשונה במערכת יונקים בוגרים העצבים המרכזית (CNS) באמצעות נסיוב ללא הרומן בתרבות המערכת, assay neurosphere (NSA) של ריינולדס וייס (1992). שימוש assay, זה גם אפשרי לבודד להרחיב NSCs מאזורים שונים של מערכת העצבים העוברית. אלה ב NSCs במבחנה מורחבת multipotent הם יכולים להצמיח את שלושת סוגי התאים העיקריים של מערכת העצבים המרכזית. בעוד NSA נראית פשוטה יחסית לביצוע, לב הנהלים הפגינו כאן נדרשת על מנת להשיג תוצאות אמינה ועקבית. סרט הווידאו הזה מדגים למעשה NSA ליצור ולהרחיב NSCs מיום עובריים 14-עכבר רקמת המוח ומספק פרטים טכניים כך אפשר להשיג תרבויות neurosphere לשחזור. ההליך כולל קצירת E14 עוברי עכברים, microdissection המוח לקצור את יואילו הוד מעלתם ganglionic, ניתוק של הרקמה שנקטפו במדיום NSC להשיג ההשעיה תא בודד, ולבסוף ציפוי התאים בתרבית NSA. לאחר 5-7 ימים בתרבות, neurospheres הראשוני וכתוצאה מכך הם passaged להרחיב עוד יותר את מספר NSCs ניסויים עתידיים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. יסוד הגדרת לפני שתמשיך Dissection:

  1. נפח מתאים של המדיום המל"ל להשלים הוא מוכן על ידי ערבוב NeuroCult בינוני NSC הבסיס, NeuroCult NSC תוספי הפצת ביחס 9:01 בהתאמה.
  2. המדיום הוא התחמם בתוך אמבט מים 37 מעלות צלזיוס.
  3. בינוני הקרה HEPES שנאגרו חיוני מינימום (שולי) עם ריכוז גבוה של אנטיביוטיקה (10%) מוכן לנתיחה ומטרה כביסה. לחלופין, המדיום NSC הבסיס עם תוספת אנטיביוטיקה עשוי לשמש גם למטרה זו.
  4. 25-30 ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Assay neurosphere היא שיטת הבחירה של בידוד והרחבת בתאי גזע עצביים 1-5 בגלל הפשטות שלה reproducibility. Assay זהו כלי רב ערך עבור הדור בקנה מידה גדול של תאים במערכת העצבים המרכזית מובחן מבשר, אשר יכול לשמש הן במבחנה במחקרים vivo. יודגש כי neurospheres יכול להיווצר משני לתאי גזע עצביים בתום לב ואת אבות יותר מוגבלת. לפיכך, חישוב תדר להרכיב neurosphere פשוט מגזים בהערכת מספר NSCs בתום לב באוכלוסיה נתונה כל תא עצביות 6. כדי להעריך את תדירות NSCs בתום לב, .......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מימון מקרן אוברסטריט.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

* כדי להפוך את המכפלת, לערבב 110L חבילה של מזכרות and160ml של HEPES 1M ולהביא את נפח L 8.75 בעזרת מים מזוקקים. הגדר את PH הסופי 7.4 ולאחסן אותו ב 4 ° C.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255, 1707-1710 (1992).
  2. Morshead, C. M. Neural stem cells in the adult mamm....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

EGFT80T175

מאמרים קשורים