העברה גנטית (Transduction) של תאי אנדותל (EC) באמצעות הגנים E6 ו-E7 של נגיף הפפילומה הערה: אנו משתמשים באופן שגרתי בבקבוקי תרבית רקמות סטנדרטיים לגידול תאי אנדותל ראשוניים. עם זאת, אם מתקבל גדילה לא מספקת של תאי האנדותל, יש לשקול שימוש בבקבוקי תרבית מסחריים. גדלו תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים או לימפטיים ראשוניים של עור אנושי באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 °C ובתוספת 5% CO2 בתוך מדיום גידול לתאי אנדותל (EGM; המכיל מדיום בסיסי לתאי אנדותל [EBM] בתוספת EGM-2 BulletKit [המכיל סרום בקר עוברי, הידרוקורטיזון, גורם גדילה של פיברובלסטים אנושיים-B, גורם גדילה של תאי אנדותל וסקולריים, גורם גדילה דמוי אינסולין-1, חומצה אסקורבית, גורם גדילה אפיטללי אנושי, אנטיביוטיקה והפרין]) בבקבוק תרבית תאים T75 עד להגעה למסף (confluence) של כ-50%. עבור ההעברה הגנטית, גדלו תאי PA317 LXSN 16E6E7 באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 °C ובתוספת 5% CO2 במדיום DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) בתוספת 10% סרום בקר עוברי וחומרים אנטי-מיקרוביאליים בבקבוק תרבית תאים T150 עד להגעה למסף של כ-90%. לאחר מכן, הדגרירו למשך לילה ב-16 מ"ל מדיום. בצעו הבהרה למדיום ה-PA317 על ידי צנטריפוגה ב-300 × g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. הסירו את ה-EGM מתרבית תאי האנדותל וכסו את התאים ב-12 מ"ל של מדיום PA317 מובהר, והדגרירו למשך 4 שעות. הערה: צנטריפוגה של 16 מ"ל מדיום מותנה ב-300 × g למשך 5 דקות מניבה משקע דחוס שאינו מופרע מהסרה זהירה של 12 מ"ל מהנוזל העליון (supernatant) המובהר. עם זאת, אם קיים חשש מהעברה של תאי PA317 LXSN 16E6E7 לתרביות תאי אנדותל ראשוניים (שכן שורת תאי האריזה תגדיל את מספריה במהירות על פני תאי האנדותל), ניתן לבצע סינון של הנוזל העליון המותנה דרך מסנן של 0.45 µm לפני ההעברה. החליפו 6 מ"ל ממדיום ה-PA317 ב-EGM טרי והדגרירו למשך לילה. הזינו מחדש את תאי האנדותל ב-12 מ"ל EGM טרי והדגרירו למשך 48 שעות נוספות. לצורך תת-תרבית של תאי האנדותל, הסירו את המדיום ושטפו ב-12 מ"ל של סליין חוצץ פוספט (PBS) ללא קטיונים, הוסיפו 3 מ"ל של תמיסת דיסוציאציה אנזימטית מסחרית (למשל, TrypLE) והדגרירו ב-37 °C למשך 3 דקות. העבירו את תרחיף התאים למבחנה קונית של 15 מ"ל וצנטריפוגו ב-300 × g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. השעיו מחדש את משקע התאות שהתקבל ב-EGM טרי וחלקו באופן שווה ל-3 בקבוקי T75 בנפח סופי של 12 מ"ל EGM לבקבוק. כדי לבצע סלקציה לתאי אנדותל שעברו העברה גנטית של E6 ו-E7, הוסיפו G418 לריכוז סופי של 200 µg/mL למשך שני מעברים, ולאחר מכן ניתן לזרוע את תאי האנדותל שעברו העברה גנטית לצורך הדבקה או להקפיאם בחנקן נוזלי. מקאליסטר, S. C., הנסון, R. S., ואחרים. מודל In Vitro לחקר טרנספורמציה תאית על ידי וירוס ההרפס של סרטן קפושי. .J. Vis. Exp.(2017)
סרטון זה מדגים טרנסדוקציה רטרו-ויראלית של תאים אנדותלליים ראשוניים עם אונקוגנים HPV16 E6/E7. האונקוגנים המשולבים מבטלים את פעולתם של מדכאי הגידולים p53 ו-Rb, ובכך מאריכים את חיי התאים. סלקציה באמצעות G418 מעשירה את אוכלוסיית התאים הטרנסדוקטיביים, ומניבה תרביות אנדותלליות מונצחות המתאימות למחקרי טרנספורמציה
