מאמר שיטה

ויזואליזציה והערכת גודל של Faustovirus באמצעות מיקרוסקופיה אלקטרונית

50 צפיות

31 באוגוסט 2026

במאמר זה

תקציר

מיקרוסקופיה אלקטרונית לאחר הזיהוי הראשוני על השקופיות, העריך את נוכחותו של הוירוס הענק באמצעות תצפית במיקרוסקופ אלקטרוני של תרביתי העל. הנח 5 µl מהדגימה החיובית על רשת שעברה פריקה זוהרת (glow-discharge). המתן כ-20 דקות בטמפרטורת החדר. ייבש את הרשת בזהירות והנח עליה טיפה קטנה של ammonium molybdate בריכוז 1% למשך 10 שניות. השאר את הרשת להתייבש למשך 5 דקות. בצע מיקרוסקופיה אלקטרונית ב-200 keV. הנח את הרשת על התומך; הכנס את התומך לתוך המיקרוסקופ. בדוק את סקירת הוואקום על ידי לחיצה על האייקון המתאים. סגור את השסתומים והתחל בתצפית בגודל נקודה (spot size) 5 ובהגדלה של 25,000x. מדוד את הוירוס הענק באמצעות ImageJ או ישירות במיקרוסקופ בעזרת כלי המדידה של המיקרוסקופ הממוקם במסך הרכישה. הערה: סווג את הדגימה לקבוצת ה-Faustovirus עם גודל קפסיד של כ-200 nm. בו ח'ליל, ג'. י'. , ואחריםאסטרטגיה מהירה לבידוד של Faustoviruses חדשים מדגימות סביבתיות באמצעות Vermamoeba vermiformis. .J. Vis. Exp (2016).

סרטון זה מדגים דימוי של חלקיקי Faustovirus מתרבית אמבה מזוהמת באמצעות מיקרוסקופיה אלקטרונית חודרת (TEM). הסרטון סוקר את הכנת הרשת, צביעה שלילית עם ammonium molybdate לשיפור הניגודיות, וויזואליזציה של הנגיף תחת המיקרוסקופ. הפרוטוקול מסתיים במדידת גודלו של ה-Faustovirus באמצעות כלי התוכנה המשולבים במיקרוסקופ.

פרוטוקול

  1. מיקרוסקופיה אלקטרונית
    1. לאחר הזיהוי הראשוני על השקופיות, העריכו את נוכחותו של הענק-וירוס באמצעות תצפית במיקרוסקופ אלקטרוני של תרביות העל (supernatant cultures).
    2. הטילו 5 µl מהדגימה החיובית על רשת שעברה פריקה זוהרת (glow-discharged grid). המתינו כ-20 דקות בטמפרטורת החדר.
    3. ייבשו את הרשת בזהירות והטילו עליה טיפה קטנה של 1% ammonium molybdate למשך 10 sec. השאירו את הרשת להתייבש למשך 5 min.
    4. בצעו מיקרוסקופיה אלקטרונית ב-200 keV.
    5. מקמו את הרשת על התומך; הכניסו את התומך אל תוך המיקרוסקופ. בדקו את סקירת הוואקום על ידי לחיצה על האייקון המתאים. סגרו את השסתומים והתחילו בתצפית ב-spot size 5, ובהגדלה של x 25,000.
    6. מדדו את הענק-וירוס באמצעות ImageJ או ישירות במיקרוסקופ בעזרת כלי המדידה של המיקרוסקופ הממוקם במסך הרכישה (acquisition screen).
      הערה: סווגו את הדגימה לקבוצת ה-Faustovirus עם גודל קפסיד של כ-200 nm.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
זן Amoeba CDC-19ATCCצרפת50237
צלחותCellstarצרפת655180
מסנני ואקוםThermo scientificצרפתBPV4550 / 20170115
סליין בבופר פוספטThermo Fisher Scientificצרפת10010-023
צביעת DAPILife TechnologiesצרפתD1306
רשתות פחמןEuromedexצרפתFCF400NI
אמוניום מוליבדטVWR Internationalצרפת21276185
בקבוקיםSARSTEDTגרמניה833911
0.22 μm מסנניםMilex milliporצרפתSE2M229104
אולטרה-צנטריפוגה Sorval WX 80Thermo Scientificצרפת9102448
מסנני זרימה מהירהNalgeneצרפת450-0020

תגיות

דימוי של Faustovirusמיקרוסקופיה אלקטרונית חודרתצביעה שליליתAmmonium Molybdateמדידת גודל נגיףהכנת רשתVermamoeba vermiformisריצוף גנום נגיפיויזואליזציה של נגיף ענק