מאמר שיטה

הדמיה של ננו-חלקיקי נגיף הדלקת הכבד E באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים חודר (TEM)

10 צפיות

⸱

30 בספטמבר 2026

במאמר זה

תקציר

תצפית על ננו-חלקיקי נגיף ההפטיטיס E ‏(HEVNPs) באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים חודר (TEM) הכינו או דללו את דגימות ה-HEVNP לריכוז של 0.5 עד 2 מ"ג/מ"ל ב-10 mM של 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid ‏(MES) ב-pH 6.2 לצורך דימוי ב-TEM. יינונו את הרשתות המצופות בפחמן באמצעות פריקה זוהרת (glow discharge) בעוצמה של 40 mA למשך 30 שניות כדי ליצור פני פחמן הידרופיליים. ציוד הפריקה הזוהרת מפורט בלוח החומרים. הערה: פני הפחמן ההידרופיליים של הרשתות נשמרים למשך 30 דקות בלבד לאחר טיפול הפריקה הזוהרת. החזיקו את הרשת עם פינצטה והוסיפו 2 µL מדגימת ה-HEVNP אל הרשת, המתינו 15 עד 30 שניות, וספגו בעזרת נייר סינון. שטפו מיד את הרשת ב-ddH2O וספגו בנייר סינון. הוסיפו מיד 2 µL של uranyl acetate בריכוז 2% אל הרשת, המתינו 15 שניות, ולאחר מכן ספגו בנייר סינון. ייבשו את רשתות הדגימה על ידי הנחתן בארון ייבוש אלקטרוני להוצאת לחות למשך לילה. העבירו את הרשת ל-TEM ובצעו דימוי בהגדלה של 10-80k. ה-HEVNPs מופיעים ב-TEM כחלבונים איקוסהדרליים ריקים שקוטרם כ-27 ננומטר, וזאת בשל היעדרו של ה-RNA הנגיפי. צ'ן, סי. סי., ואחרים. פונקציונליזציה של פני השטח של ננו-חלקיקי נגיף הדלקת כבד E באמצעות שיטות צימוד כימי. .J. Vis. Exp (2018)

סרטון זה מדגים את ההכנה והצביעה השלילית של ננו-חלקיקים דמויי נגיף ההפטיטיס E לצורך הדמיה במיקרוסקופ אלקטרונים חודר (TEM). השיטה מדגישה את השלמות המבנית של חלקיקי קפסיד בלבד שהורכבו באופן עצמי, ומאשרת את אחידותם וטוהרם באמצעות הדמיה ברזולוציה גבוהה.

פרוטוקול

  1. תצפית על ננו-חלקיקי נגיף ההפטיטיס E ‏(HEVNPs) באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים חודר (TEM)
    1. הכינו או דללו את דגימות ה-HEVNP לריכוז של 0.5 - 2 mg/mL באמצעות 10 mM 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) ב-pH 6.2 לצורך דימות TEM.
    2. ייננו את הרשתות המצופות בפחמן באמצעות פריקה זוהרת (glow discharge) ב-40 mA למשך 30 s כדי ליצור פני פחמן הידרופיליים. הציוד לפריקה זוהרת מתואר בטבלת החומרים.
      הערה: פני הפחמן ההידרופיליים של הרשתות נשמרים למשך 30 min בלבד לאחר טיפול הפריקה הזוהרת.
    3. החזיקו את הרשת באמצעות פינצטה והוסיפו לרשת 2 µL מדגימת ה-HEVNP, המתינו 15 - 30 s, וספגו בעזרת נייר סינון.
    4. שטפו מיד את הרשת עם ddH20 וספגו בעזרת נייר סינון.
    5. הוסיפו מיד לרשת 2 µL של uranyl acetate בריכוז 2%, המתינו 15 s, ולאחר מכן ספגו בעזרת נייר סינון. ייבשו את רשתות הדגימה על ידי הנחתן בארון ייבוש אלקטרוני עם מסיר לחות למשך הלילה.
    6. העבירו את הרשת ל-TEM ובצעו דימות בהגדלה של 10-80k. ה-HEVNPs מופיעים ב-TEM כחלבונים איקוזהדרליים ריקים שקוטרם ~27 nm, בשל היעדרו של ה-RNA הוויראלי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
MES הידרטSigma-Aldrich Chemical CoM8250-250GMES
מכשיר פריקה זוהרת של EMSמדע המיקרוסקופיה האלקטרונית מכשיר פריקה זוהרת

תגיות

צביעה שליליתננו-חלקיקי HEVחלבוני קפסידאורניל אצטטפריקה זוהרת (Glow Discharge)רשתות מצופות פחמןמיקרוסקופיית אלקטרונים קריוגנית