במושבה שמרים והטבעה שיטה

Summary

שיטה להטבעת מושבות שמרים המאפשר חתך של מיקרוסקופ אור אלקטרונים. פרוטוקול זה מאפשר קביעה של חלוקת תאים sporulated ותאי pseudohyphal בתוך מושבות מתן כלי חדש לקראת הבנת הארגון של סוגי תאים בתוך קהילה פטרייתי.

Abstract

דפוסים של סוגי תאים שונים העוברים הוא מנגנון מרכזי בפיתוח מטזואניים. הקהילות של מיקרואורגניזמים, כגון מושבות biofilms גם להציג דפוסים של סוגי תאים. לדוגמה, שמרים ס cerevisiae, תאים sporulated ותאי pseudohyphal אינם מפוזרים באופן אחיד במושבות. החשיבות התפקודית של דפוסים המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הדפוסים הללו הם עדיין ממעטים להבין.

אתגר אחד ביחס לחקור דפוסים של סוגי תאים במושבות פטרייתי היא שבניגוד מטזואניים רקמות, תאים במושבות יחסית מצורף חלושות אחד לשני. בפרט, מושבות פטריות אינם מכילים את רמת נרחב זהה של תאי מטריקס נמצא ברוב הרקמות. כאן אנו מדווחים על שיטה להטבעת ו חתך מושבות שמרים החושף את דפוסי הפנים של סוגי תאים במושבות אלה. השיטה יכולה לשמש כדי להכין חלקים עבים (0.5 μ) שימושי במיקרוסקופ אור וחתכים דקים (0.1 μ) מתאים במיקרוסקופ אלקטרונים השידור. תאים Asci ו pseudohyphal ניתן בקלות להבחין בין תאים שמרים דמוי ביצה על ידי מיקרוסקופ אור, ואילו המבנה הפנימי של תאים אלה ניתן דמיינו ידי EM.

השיטה מבוססת על הסובבים מושבות עם אגר, שחדר אותם עם המדיום של Spurr ולאחר מכן חתך. מושבות בקוטר בטווח של 1-2 מ"מ מתאימים פרוטוקול זה. בנוסף לדמיין את הפנים של מושבות, השיטה מאפשרת הדמיה של האזור של המושבה כי פולש אגר הבסיסית.

Protocol

1. במושבה בידוד קיבוע

1. דגירה 300 מושבות על אגר בינוני בפעם המצוין (מושבה מבודדת צריך להיות 1-2 מ"מ קוטר).
2. הסר המושבה (את הפנים) ובינוניים הבסיסית בעזרת מרית צרה.
3. מניחים מספר טיפות של אגר 2% 42 ° C בשקופית באמצעות מיקרוסקופ 1 מ"ל pipetman קצה ומיד המושבה מקום על פני אגר לפני שזה מתמצק.
4. מניחים מספר טיפות של אגר 2% 42 ° C על המושבה ולאפשר לגבש.
5. ל....

Discussion

השיטה הציג חושף את המבנים הפנימיים של המושבות. בגלל השיטה יעילה בקביעת הדפוסים של סוגי תאים בטווח של ס זנים cerevisiae עם מורפולוגיות מושבה שונה, גם מינים הקשורים ס paradoxus ^5, השיטה היא גם נוטים לעבוד על מגוון רחב של פטריות ומיקרואורגניזמים אחרים.

צעד קריטי להצלחה של השיטה היא להבטיח את המושבה כולה, כולל החלק העליון של המושבה, הוא עטוף בכל פרוטוקול אגר. אם המושבות נארזים לחלוטין אגר.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
אוסמיום טטרוקסיד	אלקטרונים מיקרוסקופיה Sciences	RT 19152
תבניות הטמעת סיליקון	פישר סיינטיפיק	NC 9975029
שרף אפוקסיד ציקלואליפטי	מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית	RT 15004	ERL 4221
שרף אפוקסי	מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית	RT 13000	DER 736
נונניל סוקסיניק אנהידריד	מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית	RT 19050	NSA
2-דימתיל אמין– תנול	אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעי	RT 13300	DMAE
מדיה הרכבה	KPL Inc	71-00-16
גלגל מסתובב	טד פלה, בע"מ	Pelco 1055
Microtome	Leica Microsystems	Ultracut S