מאמר שיטה

דפוסים על תאים שקוף אופטית טין אלקטרודות תחמוצת אינדיום

DOI:

10.3791/259

⸱

20 באוגוסט 2007

 , 
1Department of Biomedical Engineering, University of California, Davis

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Non-עכירות monolayer PEG silane היה desorbed מ למיעון בנפרד אלקטרודות איטו על זכוכית על ידי יישום של פוטנציאל רדוקטיבי. אלקטרוכימי של שכבת הפשטת PEG-silane מ microelectrodes איטו מותר הידבקות התא להיערך בצורה מוגדרת מרחבית, עם דפוסי הסלולר המקביל הדוק דפוסי אלקטרודה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

היכולת לשלוט במרחב ובזמן מדויק על פני קרום התא אינטראקציות היא תנאי חשוב כדי הרכבה של רב הסלולר בונה מנה כמו מחקה במבחנה של רקמות הילידים. במחקר זה, photolithography וטכניקות תחריט רטוב שימשו לפברק למיעון בנפרד תחמוצת אינדיום בדיל (איטו) אלקטרודות על מצעים זכוכית. מצעים זכוכית המכיל microelectrodes איטו שונו עם פולי (אתילן גליקול) (PEG) silane כדי להפוך אותם חלבונים בתא התנגדות. נוכחות של בידוד מולקולות PEG על פני האלקטרודה אומתה על ידי voltammetry מחזורית העסקת אשלגן ferricyanide כמו מולקולה כתב חיזור. חשוב לציין, את יישום הפוטנציאל רדוקטיבי גרם desorption של שכבת PEG, וכתוצאה מכך התחדשות של משטח אלקטרודה מוליך המראה של טיפוסי פסגות חמזור ferricyanide. יישום הפוטנציאל רדוקטיבי גם בקנה אחד עם מיתוג של נכסים איטו אלקטרודה מתא שאינו דבק דבק תאים. אלקטרוכימי של שכבת הפשטת PEG-silane מ microelectrodes איטו מותר הידבקות התא להיערך בצורה מוגדרת מרחבית, עם דפוסי הסלולר המקביל הדוק דפוסי אלקטרודה. Micropatterning של סוגי תאים שונים הודגם על מצעים אלו. בעתיד, את השליטה על מאפייני biointerfacial המוענקת על ידי שיטה זו תאפשר מהנדס microenvironments הסלולר באמצעות הרכבה של שלושה או יותר סוגי תאים לתוך תצורת גיאומטרי מדויק על מצע שקוף אופטית.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אני חלק: דפוסים של האלקטרודות

  1. נקו מיובש שקופיות איטו זכוכית מצופה היו מצופים photoresist חיובי
  2. השטח היה אפוי על 100 ° C כדי להסיר ממיסים מן להתנגד
  3. לאחר האפייה, פני השטח נחשף לאור אולטרה סגול דרך photomask באמצעות מסכת Canon Aligner
  4. אזורים חשופים הוסרו פתרון מפתח
  5. השטח היה אפוי קשה להסיר כל פתרון מפתח הנותרים
  6. אזורים איטו לא מוגן על ידי דפוסים photoresist נחרתו משם etchant חומצה
  7. Photoresist נותרת הוסר על ידי sonicating ב אצטון כדי ליצור את האלקטרודות איטו

חלק שני: שינוי פני השטח

  1. אלקטרודות השתנה מנקים בתא פלזמה שונה עם PEG 2% silane ב טולואן. הדגירה מתבצעת למשך 2 שעות, ואחריו 2 שעות של אפייה.

הערה: תהליך זה מתבצע בתוך שקית כפפה מלא חנקן כדי למנוע נוכחות של לחות, כמו PEG silane הוא מגיב אליה.

חלק שלישי: אלקטרוכימיה

  1. חוטי פלדה מחוברים רפידות אלקטרודה.
  2. האלקטרודות silane PEG שונה ממוקמים בתא אלקטרוכימי לבצע ניסויים אלקטרוכימיים.
  3. PEG silane מאזורים ביניהם הוא פשט באמצעות מערכת תלת אלקטרודה PBS.

חלק רביעי: דפוסים Cell

  1. Fibroblasts מודגרת עם מצעים חשוף לאחרונה. לאחר דגירה, תאים אלה לצרף את האזורים silane PEG חשוף, אך התאים לא להיקשר בכל מקום אחר על פני השטח.
  2. תאים Patterned מודגרת בתקשורת טריים דמיינו באמצעות מיקרוסקופ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בסרטון הזה, אנחנו הדגימו את דפוסים תא שקוף אופטית על פח אלקטרודות תחמוצת אינדיום. לאחר בודה את האלקטרודות איטו באמצעות photolithography, הם שונו עם monolayer תא התנגדות של PEG silane. Monolayer זה היה desorbed באמצעות מיתוג אלקטרוכימיה את פני השטח של התא מתנגד דבק תאים. דפוסים של fibroblasts Murine 3T3 הוכח וידאו שלו. יש לנו גם hepatocytes דפוסים, תאים ראשוניים, ותאי stellate שימוש באותה טכניקה. בנוסף, על ידי ביצוע אלקטרודות בודדים מרובים, אנו יכולים להרחיב זה טכניקה להרכיב סוגי תאים רבים. יתר על כן, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תחמוצת פח אינדיוםטכנולוגיות דלתא אחרותCB 40IN
PEG סילאןריאגנטג'לסט בע"מSIM6492.66
מגיבחומצה הידרוכלוריתסיגמא-אולדריץ320331
מגיבחומצה חנקתיתסיגמא-אולדריץ'258121
מגיבאתנולסיגמא-אולדריץ'459836
מגיב אצטוןסיגמא-אולדריץ'650501
מגיב טולואןסיגמא-אולדריץ'34866
מגיב מדיהInvitrogen
מגיב קולגןסיגמא-אולדריץ'C3867
3T3 פיברובלסטים עכבריםקו תאיםATCC
'

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, J. Y., Jones, C., Zern, M. A., Revzin, A. Analysis of Local Tissue-Specific Gene Expression in Cellular Micropatterns. Analytical Chemistry. 78, 8305-8312 (2006).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Indium Tin Oxide ElectrodesPhotolithography ProcessElectrochemical Cell AdhesionPEG Silane ModulationCell Patterning TechniqueOptically Transparent SubstratesTissue Engineering MethodsMicrofabrication ProtocolsElectrochemical StrippingFibroblast Adhesion Assay

מאמרים קשורים