מאמר שיטה

מדידת קואורדינציה מוטורית בעכברים

DOI:

10.3791/2609

⸱

29 במאי 2013

1Department of Experimental Psychology, University of Oxford

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקולים מוצגים לשתי הוקמו משימות מוטוריות קואורדינציה, בר rotarod והאופקי המואץ, גם שתי בדיקות שפותחו באוקספורד לאחרונה, מוטות סטטיים ומקבילים. בדיקות אלו יכולות לזהות ליקויים מוטוריים פוטנציאל של עניין בזכות עצמם, כמו גם להיות משתנים אפשריים במבחנים בתחומים אחרים של התנהגות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עכברים משמשים יותר ויותר במדעי מוח התנהגותי, במידה רבה, החלפת חולדות כחיה של ההתנהגותית של בחירה. לפני שניתן יהיו להעריך היבטים של התנהגות כגון רגשנות או קוגניציה, לעומת זאת, הוא חיוני כדי לקבוע אם היכולות המוטוריות של עכבר מוטנטי או lesioned למשל לאפשר הערכה זו. ביצועים במשימה מבוך כוח המחייב ותיאום, כמו מבוך המים של מוריס, עלולים להיפגע בעכבר על ידי מנוע, ולא קוגניטיבי, ליקויים, ולכן זה חיוני כדי לנתח את האחרון מהראשון באופן סלקטיבי. לדוגמה, הסנסורית ליקויים שנגרמו על ידי היריבים NMDA הוכחו לפגוע במי ביצועי מבוך 2.

הקואורדינציה מוטורית באופן מסורתי כבר העריך בעכברים וחולדות על ידי בדיקת rotarod, שבו החיה ממוקמת על מוט אופקי שמסתובבת על הציר הארוך שלה; החיים חייבים ללכת קדימה כדי להישאר זקוף ולא ליפול.מהירות שנקבעה והן גירסאות מואצות של rotarod זמינות.

שלוש הבדיקות האחרות שתוארו במאמר זה (פס אופקי, מוטות סטטיים ומקבילים) כל תיאום המידה במנגנון סטטי. הפס האופקי דורש גם כוח לביצועים נאותים, במיוחד של forelimbs כמו העכבר בתחילה להתמודד עם הבר רק את רגליו הקדמיות.

חולדות מבוגרות לא מתפקדות היטב במבחנים כגון מוטות סטטיים וברים מקבילים (תצפיות אישיות); הם מופיעים מתואמים פחות טובים מאשר עכברים. אני צריך לבדוק רק חולדות זכרים, לעומת זאת, ועכברי זכרים נראים בדרך כלל פחות מתואם היטב מאשר נקבות. עכברים מופיעים יש כוח גבוה יותר: יחס משקל מאשר חולדות; שמו הלטיני, מאסכאלאס Mus, נראה מתאים לחלוטין. Rotarod, הווריאציות של מבחן אשמת רגל 12 או המנגנון (Noldus) Catwalk 15 משמשות בדרך כלל כדי להעריך את הקואורדינציה מוטורית בחולדות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התנהגות עשויה להתבטא בפעולה, ופעולה דורשת מיומנויות מוטוריות, כולל תיאום של הגוף. אחד הניסויים הראשונים בהיסטוריה של התנהגות בעלי החיים בוצע על ידי קולין סטיוארט, דוקטורנטית באוניברסיטת קלארק בארצות הברית 11. הוא מדד את הפעילות של חולדות על ידי לשים אותם לתוך תוף וספר את מספר פעמים שהוא פנה. מנגנון מוקדם זה היה כנראה הגלגול של פועל גלגלים ובדיקת rotarod משמשת כיום, אם כי במנגנון סטיוארט החולדה הייתה בתוך התוף, התנועה שהייתה מונעת על ידי החולדה, ואילו בrotarod בעלי החיים הולכים על הצד החיצוני של תוף מסתובב או מוט שהוא מונע במנוע.

המוט המקורי בשימוש על ידי דאנהם ומייה (1957) 7 הייתה מהירות שנקבע, אך כיום מאיצים גירסאות (ג'ונס ורוברטס 1968) 9 זמינות. החסרון של rotarod מהירות מוגדרת הוא שחלק מבעלי החיים עם תיאום גרוע ייפלו עלההתחלה, ואילו לאלה שנשארים ב, המבחן בקרוב תתחיל למדוד את סיבולת ולא תיאום כשלעצמה. הפצת bimodal התוצאה של נקודות נתונים עשויה להיות מספיק חריגה ככדי למנוע ניתוח פרמטרים. כאשר נעשה שימוש בrotarod ההאצה, במיוחד אם הוא הואץ רק כאשר קריטריון שנקבע, כגון להישאר בעבור 10 שניות, מושגת, הפצת נתונים היא סיכוי גבוה יותר להיות גאוס. קצב ההאצה יכול להיות מותאם כך שעייפות המנוע לא משחקת תפקיד משמעותי בביצועים; עכבר לא סביר שיהיה עייף במידה ניכרת לאחר שרק 2-3 דקות בזמן rotarod.

"מבחן המחרוזת" 1, "מבחן קולב" או פס אופקי מודד את כוח ותיאום forelimb. שני הכינויים המצוטטים מתייחסים להתפתחות שלה: במקור מחרוזת הייתה בשימוש, אך החוקרים ציינו כי ביצועים תלויים במידה רבה באופן שהייתה מתוח המחרוזת, ומכאן הנסיינים עתידיים משמשים מוט מתכת, לעתים קרובות קולב. מצאנו כי היכולת של עכבר כדי להחזיק את המוט עומד ביחס הפוך לקוטרו, והשתמשתי בסרגל 2 מ"מ standardly. בבדיקת המשקולות (ראה פרוטוקול יופיטר "מדידת עוצמת העכברים") החוט הדק מאוד של אספן פרווה / קנה המידה קומקום מאפשר לבעלי החיים החזקים, כדי להבטיח את אחיזה כל כך טובה שהם יכולים להרים יותר ממשקל הגוף שלהם. עם זאת, שימוש בפסים אופקיים בקוטר גדול יותר יכול להיות יתרון כמו הרגישות של הבדיקה משפרת; רק עם סרגל מ"מ 2 C57BL / 6 עכברים נורמלים ביותר להגיע לביצועי תקרה. ומכאן יש לנו לאחרונה אימצה מנגנון שלושה הבר; הסורגים יכולים להיות בקלות להחלפה כפי שהם משתלבים בחריצים חתוכים לצמרות עמודי התמיכה. הסורגים מתקיימים תחת מתח (חשוב במיוחד כדי להפוך את שורת 2 מ"מ נוקשה) כפי שהם יתאימו רק את המגרעות שבו תומך נמשכים מעט ביחד (כמו קשת ארוכה והמחרוזת שלה) (ראה איור 3).

כבר בשימוש על מוטות או קורות סטטיים לעתים קרובותכדי למדוד את התיאום, אבל מוטיבציה נוספת תמיד לשכנע את בעלי החיים כדי לעבור את המוט. הם ניהל משא ומתן קורה אופקי להגיע ליעד רצוי, כגון כלוב בבית, מפלט מאור בהיר, או אוכל (אם הם נעשו רעבים). עם זאת, במהלך חקירת סוג של מבחן זה, גילו שהעכברים היינו להסתובב באופן ספונטני כאשר הוא ממוקם בקצה "הפתוח" של מוט בטון לסירוגין, ולאחר מכן לעבור את זה עד שהם הגיעו לסוף נתמך. טכניקה זו מבטלת את הצורך בהכשרה (יש צורך בבדיקת גרסאות שהוזכרו קודם לכן) כתגובה המולדת של עכבר כדי שיוצבו בסמוך לסוף מוט מוגבה היא לנסות להגיע לסוף נתמך. זו אינה, כמובן, לחסל את הבעיה, כי שינויים עלולים להשפיע על ביצועי מוטיבציה, שהוא תמיד אפשרות עם סוג זה של הליך.

מנהרות קרטון כיום הרבה משמשות להעשרה סביבתית בבית הכלוב, אבל disadתצפית בהקשר הנוכחי היא שבעלי החיים יהיו בהכרח להיות מתורגל באיזון בצילינדרים שיכולים להתנדנד על הציר הארוך שלהם, מחקה את הכישורים הדרושים כדי לאזן על rotarod. לפיכך העשרת כלוב בבית עלולה להסוות פנוטיפ התנהגותי; דוגמה לכך היא שיפור של פנוטיפ מחלת הנטינגטון על ידי העשרה 14. גם חיות לעתים קרובות ללכת לאורך הציר הארוך של מנהרות אלה, כמו בעת הליכה לאורך קורה סטטי מוגבה. לכן בניתי זוג מקבילים גבוהים, והניח את העכברים באמצע עם רגליו הקדמיות על פס אחד וhindpaws מצד השני, מצב שבו הם לעולם לא נתקלו בעבר. עכברים היו צריכים להגיע לסוף תומך מהמקבילים תוך שמירה זקופה כדי לעבור את המבחן. מכשיר דומה במקצת היה סדרה של מקבילים שהונחו בכלוב עכבר כדי להעריך את ההתפתחות מרוסקת-Induced מנוע תפקוד 13.

עכשיו אנחנו צריכים לבדוק כמה מאהעכברים לתפקוד מוטורי באוקספורד. אלה שקיבל טיפולים שונים, כולל סוכנים תרופתיים, או העברה פסיבית של רקמות (פלזמה) מבני האדם, אך בעיקר חיות מהונדסות גנטיים. חלק מבעלי החיים יותר היו לקויים בכוח ממשימות תיאום, אחרים להיפך. עכברים מסוימים היו יותר נפגעים בrotarod מאשר על מצעים סטטיים כגון מוטות סטטיים וברים מקבילים, אחרים להיפך. אז המאמר בהווה ובפרוטוקול הנלווה יופיטר "מדידת כוח בעכברים") מתאר כיצד לאפיין את דרך טיפולים ומוטציות שונים יכולים להשפיע באופן דיפרנציאלי תפקוד מוטורי בעכברים. מלבד rotarod המנגנון שתואר כאן הוא פשוט, זול ומתאים במיוחד למעבדות אינן מיוחדות לבדיקת כישורים מוטוריים. לניתוח הליכה בקנה מידה זעיר, מערכת Catwalk היא מערכת הרבה יותר מתוחכמת מאשר שיטות ישנות יותר, כגון לשכנע את עכבר ללכת דרך אמבטיה דיו ולאחר מכן את פיסת נייר, אבל זה expensivחתיכת דואר של מנגנון.

כל הבדיקות הללו נועדו למדוד את התיאום ולא כוח, אם כי כמובן במידה מינימאלית של טונוס שרירים יש צורך פשוט לעכבר כדי להשתמש באיבריו. להערכת חוזק, מסך ההליך ההפוך 10 מתאים יותר, או, אם נדרש מדידה מדורגת יותר, מבחן המשקולות או האוטומטי שלה בר למשוך שווה ערך (כמתואר ב" כוח מדידה בעכברים "פרוטוקול יופיטר). יוצא מן הכלל הוא מבחן הפס האופקי, מה שדורש כוח ותיאום הן לביצועים מוצלחים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. מנגנון

לכל הבדיקות, משטח מרופד ורך מונח בבסיסו של המנגנון לכרית כל עכברים שנופלים לו. נ.ב. זו לא תוצג בדמויות, כדי לא לטשטש כל חלק של המנגנון. במהלך הבדיקות של מאות עכברים, שניהם נורמלי ומוטנטי, מעולם לא נצפה כל פגיעה הנגרמת על ידי נפילה ממנגנון כזה, שהוא בדרך כלל 30-50 סנטימטר. כמו כן, הקפד לנקות ולחטא את הציוד בין כל עכבר נבדק.

1.1 Rotarod

יש כמה גירסאות מסחריות של מנגנון זה בשוק, אבל יש כמה חסרונות, כמו שלא הצליח להאיץ במהירות מספקת כדי לזהות חוסר קואורדינציה מוטורי (ולא סיבולת). עוד תקלה נפוצה היא שהמוט לא מספיק גבוה מעל הבסיס, וכתוצאה מכך עכברים שנוטים להפיל או לקפוץ.

Rotarod מוצג באיור 1 נעשה לעיצובשל המחבר על ידי הסעיפים ההנדסיים של המחלקה לפרמקולוגיה באוניברסיטת אוקספורד. המוט הוא 3 ס"מ קוטר, 30 ס"מ נתמכים מעל הבסיס של המנגנון. פני השטח המחורצים בסדרה של רכסים מקבילים לאורך ציר האורך, מה שמאפשר את העכברים לאחוז בו ביעילות (איור 2). נ.ב. העומק של הרכסים הוא פרט חיוני, אם העכבר לא יכול לקבל אחיזה טובה במבחן יהיה מאוד קשה הרבה יותר; ומצד שני, אם האחיזה היא טובה מדי העכבר "גלגלון" סביב המוט באופן פסיבי מחזיק על זה. "למקבלי rotarod חובבים" זה עשוי להיות שימושי כדי לדעת שdowelling עץ המחורצים של גודל מתאים לעכברים הוא זמין באופן מסחרי, זה היה כמובן צריך להיות מטופלים עם לכה עמיד למים טובים לפני השימוש. מהירות ההתחלה מותאמת ל4 סל"ד, קצב התאוצה עד 20 סל"ד / דקה. מהירות המרבית הוא 40 סל"ד.

שני אוגנים למנוע את העכבר מלעזוב את המוט. הם 30 ס"מ קוטר (זהבטח היה יכול להיות מופחת עד 20 ס"מ). ההפרדה שלהם מוגדרת ב6 ס"מ (מרבי), אך ייתכן שתצטרך להיות מותאם לעכברים קטנים יותר מתבגרים, אם הם נוטים להסתובב על המוט.

1.2 פסים אופקיים משולשים (איור 3)

הסורגים עשויים מפליז, ארוך 38 ס"מ, שנערך 49 ס"מ מעל פני השטח על ידי טור ספסל עץ תמיכה בכל קצה. עמודות מובטחות לבסיס עץ כבד. שלושה קטרים ​​בר זמינים: 2, 4 ו -6 מ"מ. בר 2 מ"מ הוא תקן אחת אנו משתמשים, אבל עכברים רבים להגיע לציונים מרביים בזה. לכן ברים בקוטר גדולים יותר נכללו בניסיון לחדד את הבדיקה, כעכברים לא יכולים לאחוז אלה כל כך טובים.

1.3 מוטות סטטיים

חמישה פינים או מוטות עץ של עובי משתנה (35 (1 מוט), 28, 22, 15 מ"מ קוטר ו -9 (מוט 5)) כל 60 ס"מ ארוכים שתוקנו על ידי G-מהדק למדף מעבדה כך שהמוטות אופקית בולטות לחלל (איור 4). הסוףשל המוט ליד הספסל יש סימן 10 ס"מ מהסוף, כדי לציין את קו הסיום. הגובה של המוטות מעל הרצפה הוא 60 ס"מ.

אם נדרשת בדיקה קצרה יותר ופחות מפורטת, להשתמש רק במוטות הגדולות, הקטנות ובינוניות. ואן Dellen et al. -14 משמש רק מוט אחד כדי להעריך את ההתקדמות של מחלת הנטינגטון בעכברים.

1.4 ברים מקבילים

שתי מוטות פלדה מקבילות 1 מ 'אורך ו 4 מ"מ בקוטר 30 מ"מ קבועות (במרכזים שלהם) לגזרים על ידי עמודי תמיכה מעץ בקצותיהם (איור 5). הסורגים הם 60 ס"מ מעל הרצפה.

2. נוהל

לכל הבדיקות, להביא את עכברים לדקות 5-20 החדר הניסיוניים לפני הבדיקה, כדי לוודא שהם ער לחלוטין. ככלל, כדי לאפשר התאוששות של כוח שרירים וחזרו לרמות נורמליות של עוררות, הנח את העכברים על ידי חזרה לכלוב בבית אחרי כל בדיקת מנוע.

2.1 Rotarod

הגדר את rotarod עם מהירות התחלה של 4 סל"ד, שיעור האצת סל"ד 20 / דקה. מחזיק את העכבר בזנבו, ולמקם אותו על המוט מסתובב, עם גב אל כיוון סיבוב ולכן יש ללכת קדימה כדי להישאר זקוף. זה הכי קל לעשות אם העכבר הוא הביא את המוט לכיוון בזווית של 45 מעלות מתחת אופקי; מנסה להוריד את העכבר מלמעלה יגרמו לזה מתפשט רגליו האחוריות ואוחז את הקצוות של המסגרת. מהירות לשחרר את העכבר כאשר הוא כמעט נוגע במוט, רק קדימה של ומעל למוטות מרכז המת העליון, המאפשר לה לאחוז את המקל בקלות. טכניקה (כנראה קל יותר ואמין יותר) היא להשתמש במסמרת דקה (10-15 מ"מ). מחזיק את העכבר ביד אחת, להוריד אותו למסמרת, מקביל לציר הארוך. מסמרת היא זווית עם הראש למטה של ​​העכבר כ -30 מעלות כדי לתת לו יותר זמן לאחוז rotarod לאחר שהוא שוחרר. מנמיכים את העכבר ומסמרת בין הדואר של אוגנים rotarod, ופעם אחת על המוט מסתובב למשוך כלפי מטה מסמר מהעכבר, שתופס את המוט וללכת קדימה.

ב10 שניות לאחר הצבת העכבר על המוט, להתחיל תאוצה (כל עוד העכבר הוא פונה קדימה: אם לא, חכה עד שהוא עושה פרצוף קדימה לפני תחילת ההאצה), ושים לב למהירות שבה העכבר נופל. אם זה נופל לפני 10 שניות, שים לב לזמן של נפילה ולנסות שוב, עד שלוש פעמים בסך הכל, הקלטה במהירות הנפילה הראשונה אחרי שנייה נקודת 10. עם זאת, נופל לפני 5 שניות שהן בשל הצבת עניה על ידי הנסיין לא צריך להיות מוקלטים. המהירות הממוצעת בעת הנפילה היא נתון; ולא באמצעות המהירות המרבית, זה מתקן לתרגול נוסף העכבר מקבל במהלך הריצות נכשלו, שבו הוא הניח יסייע ביצועים. כך עכבר שנופל לפני 10 שניות פעם אחת ולאחר מכן נשאר על 12 סל"ד ועד עשרות הפעם השנייה (4 +12) / 2 = 8 סל"ד. עכבר נופל פעמיים לאחר מכןנשאר על 10 סל"ד ציונים (4 +4 +10) / 3 = 6 סל"ד. אם עכבר אינו אחיזה ב10 שניות שלוש פעמים להקצות לו ציון של 4 סל"ד.

בעיה אחת היא שעכברים לפעמים לעצור הליכה קדימה ולאחוז במוט בחוזקה במקום, כך שהם פסיביים סלטה סיבוב, למרות שרוב סופו של דבר ליפול. זה יכול להיות שימושי גם כן לציין את המהירות, כאשר ההיפוך הראשון מסוגו מתרחש. פתרון אפשרי עשוי להיות לשימוש מוט בקוטר גדול יותר או פחות מובהקים רכסים.

2.2 פסים אופקיים

כמו עכברים מוצאים את זה הקל ביותר כדי לתפוס את שורת 2 מ"מ הצר, רצוי לבדוק אותם ראשונה על זה. מחזיק את העכבר בזנבו, למקם אותו על הספסל בקדמת המכשיר, חלק אותו במהירות אחורה על 20 ס"מ (זה מיישר אותו בניצב בר), להעלות אותו במהירות ולתת לו לתפוס את הפס האופקי בנקודה המרכזית עם כפות רגליו הקדמיות שלה בלבד, ולשחרר את הזנב, בו זמנית החל stopclock. זה גלהיות קשה להשגת יעילות, חלקם עכברי אחיזה טובה יותר אם הזנב הוא שוחרר פתאום, אם הם מרגישים שהם עדיין נתמכים הם עלולים להיכשל כדי אחיזה. נקודת הקריטריון היא או נפילה מהבר לפני העכבר מגיע לאחד מהעמודים בסופו של הבר, או הזמן עד כף אחת נוגעת בעמודה. זמן בדיקה מקסימאלי (זמן חתך) הוא 30 שניות.

אם העכבר לא מצליח לתפוס את בר כראוי פעם ראשונה וזה נראה מיוחס לטכניקה של הנסיין, ולא העכבר, נסה שוב (לאחר מנוחה קצרה ואילו עכברים אחד או שניים נוספים נבדקו) ולא להקליט בסתיו הקרוב. אם העכבר נופל לפני 5 שניות וזה כנראה לא בשל הצבת עניה על ידי הנסיין, חזור עד שלוש פעמים בניסיון לקבל ציון> 5 שניות. אם> 5 שניות על הניסיון השני, אל תעשו את ניסוי שלישי. קח את הציון הטוב ביותר כנתון. עכבר שנכשל שוב ושוב כדי לתמוך בעצמו ל> 5 שניות ציונים רק 1.

אם אתה משתמש בגרסה משולשת הבר, אם ציונים של העכבר על סרגל 5 מ"מ זה ראשון 2 אז יכול להיות בדק את זה על סורגים עבים יותר, לאחר תקופת מנוחה קצרה ואילו עכברים אחד או שניים נוספים נבדקים. שיטת הניקוד עבור 4 ו -6 מ"מ בארים זהה לבר 2 מ"מ, והתוצאה הסופית היא סך מצטבר. כך עכבר שציונים 5 בסרגל 2 מ"מ אבל נופל מהבר מ"מ 4 לאחר 13 שניות ציונים 5 +3 = 8.

2.2.1

הבקיע את הפסים האופקיים: שני המרווחים הראשונים הם פחות משני האחרון כמו ברגע שהעכברים שולטים בתחילה את המשימה הם נוטים פחות ליפול:
נופל בין 1-5 שניות = 1
נופלים בין 6-10 שניות = 2
נופלים בין שניות 11-20 = 3
נופל בין שניות 21-30 = 4
נפילה אחרי 30 שניות = 5
הצבת כף אחת על תמיכה בר בלי ליפול = 5

נ.ב. כמו השימוש האופציונלי של 4 ו 6 מ"מ ברים היא תוספת חדשה לפרוטוקול שלנו עדיין אין לנו רבלחוות איתם.

2.3 מוטות סטטיים

מניחים את העכבר בקצו של המוט הרחב ביותר (אורכו של האף קצה הראש אחד מהסוף הוא אידיאלי). קח שני צעדים: זמן נטייה (זמן שנדרש להתמצא 180 מעלות מנקודת ההתחלה לכיוון המדף) וזמן מעבר (הזמן שלוקח לנסוע לסוף המדף (האף מעבר לסימן 10 ס"מ מקצה המדף של המוט).

כיווניות תלויה בעכבר להישאר זקוף, אם זה מתהפך ונצמד מתחת המוט, באופן שרירותי להקצות אותו (למטרות סטטיסטיות) את ציון המרבי של הנטייה 120 שניות. לא לבדוק את זה על מוטות קטנות יותר; גם זמן המעבר הופך את הערך המקסימאלי כמו עכבר שטרנזיטים זקופים הוא ללא ספק טוב יותר מפעם אחת שתאם טרנזיטים בזמן תלייה במהופך.

אם לאחר מכוון, העכבר נופל או שהוא מגיע לזמן הבדיקה המרבי (מוגדר באופן שרירותי ב120 שניות) לא לבדוק את זה על יםמוטות Maller. למטרות סטטיסטיות, עכברים להקצות נופלים מוקצים 120 עבור מוט מסוים ועבור אלה הבאים, כפי שהוא הניח שהם שוב נופלים ממוט צר יותר. אם העכבר מתהפך, גם לציין את האירוע הזה, למעבר מוצלח, כמו גם נטייתו חייבת להישאר זקופה על המוט. אחרת להקצות לו את הציון המרבי. הסר את העכבר לאחר שהוא מגיע לסופו של המוט או הנפילות.

לאחר בדיקה על מוט אחד להחזיר את העכבר לכלוב בבית לנוח בזמן שאתה לבדוק עכבר אחר. ואז מניח אותו על מוט הגודל הקטן יותר הבא ולבדוק אותו באותו אופן שוב. להפסיק בדיקות אם העכבר נופל מוט לאחר שעליו במשך יותר מ -5 שניות. אם נפל בפחות מ -5 שניות להחליף אותו ולאפשר ניסיון נוסף (כפי שנופל בתוך 5 שניות יכולים להיות עקב הצבת פגומה על ידי הנסיין), לתקופה מקסימלית של שלושה ניסויים, ולהשתמש בתוצאה הטובה ביותר.

2.4 ברים מקבילים

מניחים את העכבר בtהוא המרכז של שני הברים עם ניצב לציר האורך שלה לזה של הסורגים; שתי רגליו הקדמיות צריכה להיות על סרגל אחד, שתי רגליו האחוריות בסרגל האחר. ניקוד דומה לזה למוטות סטטיים. קח שני צעדים: לוקח את הזמן עד שהעכבר מכוון 90 מעלות למצב ההתחלה, ולאחר מכן הזמן עד שזה יגיע לאחד מהסוף תומך. אם העכבר מתהפך, גם לציין את האירוע הזה. באשר למוטות סטטיים בדיקה, כיוון והמעבר חייב להיות מושגת בלעדיו מתהפך, אחרת הזמן המרבי מוקצב. זה נדיר לעכברים בריאים סביר לרדת בפחות מ -5 שניות, ואם זה אכן יקרה זה כנראה עקב הצבה לקויה. לכן זורק את התוצאה ולבדוק שוב את העכבר.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תוצאות צפויות

מוט סטטי שימש במקור כדי לעקוב אחר ההתקדמות של מחלת הנטינגטון בעכברים שעברו מוטציה, עם או בלי העשרה סביבתית בכלובים בבית 14 שלהם. תכנית ההעשרה עכבו את תחילתו של חוסר התפקוד מוטורי על המוט, שמקבילה לעיכוב בתחילתה של כף רגל אחורית לופתת, סימן כללי של ליקוי נוירולוגים באופן דרמטי.

עכברי סקרייפי נגועים הראו ירידה בביצועי פס אופקי משבוע 16 לאחר הזרקה, בבדיקות rotarod משבוע 18, ומוטות סטטיים משבוע 19 לפחות 8 (בדיקה קודמת לא בוצעה). עכברי KO ערוץ מקטע Kir6.2 KATP היו לקויים על מוטות סטטיים ופס אופקי, אבל לא על rotarod 4. היו לי נגעים בהיפוקמפוס אין כל השפעה על כל קנה מידה של יכולת המוטורית 5, אבל עכברי 129S2/Sv היו לקויים יחסית לC57BL / 6 עומס על מוטות rotarod וסטטי 3. C57Bגם היו לי L/10 עכברי ביצועי מנוע גרועים יותר מאשר עכברי C57BL / 6 6, אם כי לא באותה המידה כמו עכברי 129S2/Sv.

figure-results-1
איור 1. Rotarod.

figure-results-2
איור 2. פירוט של המוט המחורצים של rotarod.

figure-results-3
איור 3. את הפסים האופקיים המשולשים שנערך בבר החריצים הוא בסיסי 2 מ"מ; אחד. מודבקים מתחתיו (למטרות הדגמה בלבד) הם 4 ו 6 ברים מ"מ. בפועל, שורה אחת בלבד בכל פעם, הוא מחורר לתומך מחורצים.

"איור איור 4. עכבר חוצה מוט סטטי.

figure-results-5
איור 5. עכבר על המקבילים. ריפוד הושמט לצורך הדגמה בלבד.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש המחבר אין ניגודי האינטרסים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קרן Wellcome למתן מימון גישה פתוחה לאוניברסיטת אוקספורד. רוברט דיקון הוא חבר בקבוצת OXION אוקספורד, במימון קרן Wellcome מענק WT084655MA.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barclay, L. L., Gibson, G. E., Blass, J. P. The string test: an early behavioral change in thiamine deficiency. Pharmacol. Biochem. Behav. 14, 153-157 (1981).
  2. Cain, D. P., Saucier, D., Boon, F. Testing hypotheses of spatial learning: the role of NMDA receptors and NMDA-mediated long-term potentiation. Behav. Brain Res. 84, 179-193 (1997).
  3. Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice. Behav. Brain Res. 124, 33-46 (2001).
  4. Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2. Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).
  5. Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice. Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).
  6. Deacon, R. M. J., Thomas, C. L., Rawlins, J. N. P., Morley, B. J. A comparison of the behavior of C57BL/6 and C57BL/10 mice. Behav. Brain Res. 179, 239-247 (2007).
  7. Dunham, N. W., Miya, T. S. A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice. J. Am. Pharm. Assoc. 46, 208-209 (1957).
  8. Guenther, K., Deacon, R. M. J., Perry, V. H., Rawlins, J. N. P. Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone. Eur. J. Neurosci. 14, 401-409 (2001).
  9. Jones, B. J., Roberts, D. J. The quantitative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an accelerating rotarod. J. Pharm. Pharmacol. 20, 302-304 (1968).
  10. Kondziela, W. Eine neue method zur messung der muskularen relaxation bei weissen mausen. Arch. int. Pharmacodyn. 152, 277-2784 (1964).
  11. Lindsey, J. R., Baker, H. J. Historical foundations. The laboratory rat. Suckow, M. A., Weisbroth, S. H., Franklin, C. L. , 2nd, Elsevier Academic Press. (2006).
  12. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: a new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. J. Neurosci. Met. 15, 169-179 (2002).
  13. Sigurdsson, E. M., Brown, D. R., Daniels, M., Kascsak, R. J., Kascsak, R., Carp, R., Meeker, H. C., Frangione, B., Wisniewski, T. Immunization Delays the Onset of Prion Disease in Mice. Am. J. Pathol. 161, 13-17 (2002).
  14. van Dellen, A., Blakemore, C., Deacon, R., York, D., Hannan, A. J. Delaying the onset of Huntington's in mice. Nature. 404, 721-722 (2000).
  15. Vandeputte, C., Taymans, J. -M., Casteels, C., Coun, F., Ni, Y., Van Laere, K., Baekelandt, V. Automated quantitative gait analysis in animal models of movement disorders. BMC Neuroscience. 11, 92(2010).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

arod

מאמרים קשורים