שואב דם יש צורך במספר רב של מחקרים, למשל ללמוד את פרופיל פרמקוקינטיקה של תרכובת. כאן, אנו מדגימים כיצד להקיז דם מן החולדות באמצעות שתי טכניקות: להקיז דם מהעורק saphenous או לנקב לב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ציור דם מן החולדות דרך וריד Saphenous ועל ידי נקר לב
במאמר זה
סיכום
תקציר
ציור דם מכרסמים הוא הכרחי עבור מספר גדול של הן במבחנה במחקרים vivo. אתרים של דם שואבת הן רבות במכרסמים: לב רטרו מסלולית סינוס, וריד, וריד לסתי, וריד saphenous,. טכניקה לכל היתרונות והחסרונות שלה, וחלק אינם מאושרים יותר במדינות מסוימות (למשל, רטרו מסלולית שואבת בהולנד). דיון בטכניקות שונות של ציור דם הם 1-3 זמין. כאן, אנו מציגים שתי טכניקות ציור דם חולדות, כל אחד עם יישומים ספציפיים שלה.
להקיז דם מהעורק saphenous, בתנאי שזה נעשה כראוי, גורמת מצוקה מינימלית בבעלי חיים ואינו דורש הרדמה. טכניקה זו מאפשרת חזר שואבת של כמויות קטנות של דם, כגון הצורך ללימודי פרמוקוקינטיים 4,5, בקביעת כימיה פלזמה, או ספירת דם 6.
לנקב לב מאפשר איסוף כמויות גדולות של דם מבעל חיים אחד (עד 10 מ"ל של דם ניתן להסיק חולדה ז 150). טכניקה זו שימושית מאוד ולכן כהליך סופני כאשר ציור דם saphenous לא יספק מדגם מספיק גדול. אנו משתמשים לנקב לב כאשר אנחנו צריכים כמות מספקת של בסרום של זן מסוים של חולדות לגדול קווי לימפוציטים T במבחנה 4-9.
פרוטוקול
ציור דם מן החולדות דרך וריד Saphenous ועל ידי נקר לב
הערה: כל הנהלים חייב להיות מאושר על ידי טיפול בבעלי חיים במכון שלך, ועדה להשתמש.
1. שואבים דם בווריד saphenous
- הליך זה מבוצע ללא הרדמה דורש שני אנשים, מי מטפל חולדה, ומי מבצע את תיקו.
- הפוך חרוט מתוך מגבת או להחזיק את העכברוש עם כפפות מכרסם טיפול, עוזב אחד הגפיים האחוריות חשוף.
- לגלח את החלק האחורי של הרגל עם גוזם חשמלי עד הווריד saphenous גלוי. שבי שטח מספיק גדול, כך השיער לא יבוא במגע עם האתר לנקב. השתמש כמות קטנה של קרם שאינו ריחני יד כדי לשמור על השיער הלא מגולח מהמקום לנקב.
- הקפידו דחיסה בבסיס של הרגל על מנת להפוך את וריד saphenous בליטה החוצה (בדומה באמצעות חוסם עורקים כאשר זוב דם מבן אדם או חיה גדולה). את הווריד לנקב באמצעות מחט 20 גרם ו סקופ הדם כפי שהוא יוצא באמצעות microvette. שאיבה עם הרגל תסייע להקיז דם ועוד. לאחר שאספת מספיק דם, להחזיק לדחוס נקי באתר לנקב כדי לעצור את הדימום.
2. דם לצייר על ידי לנקב לב
- הליך זה מחייב הרדמה היא סופנית. בעלי חיים צריכים להיות מורדמים מיד בסוף לנקב לב.
- הכן מזרק 5 מ"ל עם מחט 23G1.
- עמוק anesthesize את העכברוש ולבדוק הרדמה על ידי חוסר תנועה ספונטנית, קצב נשימה איטי, חוסר תגובה לגירויים (כגון צובט אצבע). כדי להבטיח הרדמה ממושכת, במקום לחבית מזרק המכיל מגבת נייר ספוגה הרדמה נדיף על אפו של עכברוש במהלך ההליך.
- מניחים את חולדה על גבו, מול ממך.
- אם אתם ימניים, מקום לאצבע שמאל ברמה של הצלעות הנמוך ביותר, ללא החלת כל לחץ. הלב יהיה ממוקם ~ 1 ס"מ מעל לנקודה זו, מעט ימינה.
- החזקת המזרק שלך בזווית של 45 מעלות, להכניס את המחט בין שתי הצלעות לצפות טיפת דם להיכנס המחט. זו אינדיקציה לכך שאתה בלב. מבלי להזיז מזרק שלך, יש למשוך את הבוכנה כדי למלא את המזרק. לאחר מזרק מלא, בזהירות נתק אותו המחט ולרוקן אותו לתוך צינור. מזרק אז יכול להיות מחדש מחוברת המחט לציור יותר דם. זה צריך להיות אפשרי לצייר 50-10 מ"ל של דם חולדה 120-180 גרם.
- מיד להרדים את העכברוש.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ציור דם מהעורק saphenous הוא דרך נוחה לקבל כמויות קטנות של דם ללא הרדמה. אם הדגימה חזר נדרש, לבדוק את התקנות כדי לוודא שאתה לא למשוך יותר מדי דם מן עכברוש אחד.
ציור דם על ידי לנקב לב הוא דרך נוחה לקבל כמויות גדולות של דם, אבל זה הליך סופנית. בעל חיים חייב להיות מורדמים בסוף לצייר את הדם.
טכניקות אלו (כמו כל טכניקות בבעלי חיים) צריך להיעשות הראשון בנוכחות וטרינר או טכנאי וטרינרי אשר יוכלו להעריך כי החיות מטו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| מחט 20G 1/2 | כלי | BD Biosciences | 305176 | לניקור הווריד הספנוס |
| Microvette 300 | כלי | Sarstedt Ltd | 20.1308.100 | לאיסוף דם מהווריד הספנוס |
| קוצץ חשמלי | כלי | Braintree Scientific, Inc. | CLP-32130 | |
| מחט 23 G 1 | כלי | BD Biosciences | 305145 | לניקור הלב |
| מזרק פלסטיק 5 ml, קצה חלק (slip tip) | כלי | Fisher Scientific | 14-826-12 | לניקור הלב |
מקורות
- Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
- Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
- Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).
- Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).
- Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 936-944 (2001).
- Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. , 317-320 (2003).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
