אנו מדגימים את metalation, טיהור, ואפיון של מתחמי lanthanide. מתחמי המתואר כאן יכול להיות מצומדת כדי מקרומולקולות כדי לאפשר מעקב של המולקולות הללו באמצעות דימות בתהודה מגנטית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
, טיהור הכנה, אפיון של מכלולים Lanthanide לשימוש בתור סוכנים בניגוד עבור דימות תהודה מגנטית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
Polyaminopolycarboxylate מבוססי ligands משמשות Chelate יונים lanthanide, ואת התסביכים הנובעים שימושיים כמו סוכנים בניגוד עבור דימות תהודה מגנטית (MRI). Ligands זמינים מסחרית רבים שימושיים במיוחד משום שהם מכילים קבוצות פונקציונליות המאפשרים מהיר טוהר גבוהה, גבוהה מניב הצמידה אל מקרומולקולות ביומולקולות באמצעות אמין-reactive אסטרים מופעל וקבוצות isothiocyanate או תיאול-reactive maleimides. בעוד metalation של ligands אלה נחשב וידוע בתחום הכימיה bioconjugation, הבדלים דקים נהלים metalation חייב להילקח בחשבון בעת בחירת חומרי מתכת ההתחלה. יתר על כן, מספר רב של אפשרויות עבור טיהור קיים אפיון, ואת הבחירה של ההליך היעיל ביותר חלקית תלוי בבחירה של חומרי המוצא. הבדלים אלה הם עדין מוזנח לעתים קרובות בפרוטוקולים שפורסמו. הנה, המטרה שלנו היא להוכיח השיטות הנפוצות עבור metalation, טיהור, ואפיון של מתחמי lanthanide שיכולים לשמש כסוכני בניגוד עבור MRI (איור 1). אנו צופים כי פרסום זה יאפשר למדענים ביו לשלב התגובות complexation lanthanide לתוך רפרטואר התגובות שלהם בשימוש נפוץ על ידי הקלת הבחירה של חומרי המוצא ושיטות טיהור.
פרוטוקול
1. Metalation באמצעות LnCl 3 מלחי
- ממיסים את ליגנד במים כדי לייצר פתרון 30-265 מ"מ. ליגנד 2 - (4-isothiocyanatobenzyl)-diethylenetriamine חומצה pentaacetic (p-SCN-BN-DTPA) שימש וידאו זה בריכוז של 73 mM.
- התאם את ה-pH של התמיסה של ליגנד על בין 5.5 ו 7.0 על ידי הוספת 1 M NH 4 OH. בסרטון הזה, 0.2 מ"ל של הפתרון 1 M NH 4 OH היה בשימוש.
- ממיסים 1-2 ושווי של LnCl 3 במים כדי לייצר פתרון עם ריכוז....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בהתחשב במספר הולך וגדל של פרסומים הכוללים lanthanide מבוססי סוכנים בניגוד 4-14, חשוב כי הטיפול נלקח בהכנת, טיהור, ואפיון מוצרים כדי להבטיח תוצאות לשעתקו דומה. קומפלקסים אלה נחשבים לעתים קרובות מאתגרת לטהר ולאפיין יחסית מולקולות אורגניות בשל אופי פאראמגנטיים שלהם את הרגישות של כל קבוצות פונקציונליות שניתן להשתמש בו עבור bioconjugation. תיארנו שיטות מקובלות לסינתזה, טיהור, ואפיון של מתחמי lanthanide. עם זאת, כאשר בוחרים באחת השיטות הבאות חשוב לבחון את מערכת ספציפית הנלמד........
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
בהכרת תודה אנו מודים קרנות ההפעלה של וויין סטייט (MJA), מענק מהקרן האמריקנית לחקר ההזדקנות (SMV), וכן נתיב בפרס קריירה מעבר העצמאות (R00EB007129) מן המכון הלאומי של הדמיה ביו Bioengineering של המכון הלאומי לבריאות (MJA).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ריאגנטים וציוד | חברה | מספר קטלוגי | |
| EuCl 3 • 6 שעות 2 O | סיגמא אולדריץ | 203254-5G | |
| p-SCN-BN-DTPA | Macrocyclics | B-305 | |
| אמוניום הידרוקסיד | EMD | AX1303-3 | |
| ספקטרה / por ביוטק תאית אסתר (CE) ממברנה דיאליזה - 500 D MWCO | פישר סיינטיפיק | 68-671-24 | |
| Millipore Millex IC-LG סנן יחידות | פישר סיינטיפיק | SLLG C13 NL | |
| xylenol כתום tetrasodium מלח | אלפא Aesar | 41379 | |
| חומצה אצטית | Fluka | 49199 | |
| D 2 O | קיימברידג' איזוטופ Laboratories, Inc | DLM-4-25 | |
| מטהר מים | ELGA | Purelab Ultra | |
| ביצועים גבוהים נוזלי כרומטוגרפיה ו ספקטרומטריית מסה | Shimadzu | LCMS-2010EV | |
| זמן רגיעה מנתח | Bruker | mq60 minispec | |
| UV-VIS ספקטרופוטומטר | פישר סיינטיפיק | 20-624-00092 | |
| להקפיא מייבש | פישר סיינטיפיק | 10-030-133 | |
| ה-pH מטר | חנה מכשירים | HI 221 | |
| spectrofluorometer | HORIBA Jobin Yvon | FluoroMax-4 | |
| מולקולרית משקל מחשבון גרסה 6.46 על ידי מתיו מונרו, להוריד 17 אוקטובר 2009 | http://ncrr.pnl.gov/software/ | מולקולרית משקל מחשבון |
מקורות
- Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1, 184-188 (2006).
- Nagaraja, T. N., Croxen, R. L., Panda, S., Knight, R. A., Keenan, K. A., Brown, S. L., Fenstermacher, J. D., Ewing, J. R.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
