שימור בהקפאה בהקפאה מהירה של מוח עכבר שלם לצורך ניתוח היסטולוגי

תקציר

מקור: Comba, A. et al. Laser Capture Microdissection of Glioma subregions for Spatial and Molecular Characterization of Intratumoral Heterogeneity, Oncostreams, and Invasion. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים שימור בהקפאה של מוח עכבר כדי לבודד אזורים אנטומיים נפרדים או אוכלוסיות תאים ספציפיות מרקמות הגידול. טכניקה זו היא קריטית להשגת רזולוציה אופטית אופטימלית של מורפולוגיה של רקמת המוח לניתוח הבא.

פרוטוקול

1. שימור בהקפאה של מוחות המכילים גידולי גליומה

1. לפני שימור המוח בהקפאה, הכינו צנצנת מלאה באיזופנטאן/2-מתילבוטאן קר והכניסו אותה למיכל מלא בחנקן נוזלי. תנו לממס להתקרר.
2. הוציאו את המוח מתמיסת 30% סוכרוז וייבשו אותו על נייר פילטר.
3. תייגו את הקריומולד בטוש קבוע. בזהירות להוסיף כ 5 מ"ל של OCT (תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית) למרכז cryomold הימנעות בועות אוויר.
4. הכניסו את המוח לקריומולד המכיל OCT בכיוון הרצוי. ממלאים את התבנית ב-OCT עד שהמוח שקוע במלואו. בעזרת מלקחיים נקיים, הניחו במהירות את הקריומולד עם OCT ואת המוח לתוך איזופנטאן/2-מתילבוטאן הקר.
5. ברגע שה-OCT מתמצק (~30-40 שניות), הסר את הקריומולד עם המוח והניחו אותו בקרח יבש. אין להשאיר את העובש המכיל את המוח ב-2-מתילבוטאן מעבר ל-2 דקות מכיוון שהדבר עלול לגרום לסדקים ב-OCT. עטפו את הקריומולד במוח ברדיד אלומיניום ואחסנו אותו בטמפרטורה של -80°C.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
לקלף תבניות הטבעה חד פעמיות	מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים	70182
קריוסטט מחקר	לייקה	CM3050s
תרכובת O.C.T. רקמה פלוס	פישר סיינטיפיק	23-730-571