חתך רקמת מוח של עכבר קפוא: הליך להשגת קטעי רקמה קפואה דקה מרקמת מוח מורין קפואה

תקציר

מקור: Comba, A. et al. לכידת לייזר מיקרודיסקציה של תת-אזורי גליומה לאפיון מרחבי ומולקולרי של הטרוגניות תוך-גידולית, אונקו-זרמים ופלישה. J. Vis. Exp. (2020)

בסרטון זה אנו מדגימים חתך של רקמת גידול במוח עכבר קפואה באמצעות קריוסטט. חלקי רקמת המוח הקפואים המתקבלים כך מאוחסנים בטמפרטורות נמוכות עד לניתוח נוסף.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. חתך רקמות גידול קפואות במוח

1. תווית 2 מיקרומטר פוליאתילן נפתאלט (PEN) שקופיות עם נתוני הדגימה. מקטעי רקמות ימוקמו ישירות על שקופיות אלה לאחר המקטעים.
2. הגדר את הטמפרטורה של תא cryostat בין -20 ל -24 ° C. לפני החיתוך, הניחו את גוש הדגימה בתא ההקפאה ותנו לו להתאזן לטמפרטורה בתא למשך 30-60 דקות.
3. נקו את תא ההקפאה ואת מחזיק הסכין באתנול 100% ורססו את המברשות לשימוש בתמיסת ניקוי RNase. עבודה בתוך תא ההקפאה, הסר את התבנית וחבר את בלוק OCT המכיל את המוח לדיסק דגימת הקריוסטט עם OCT. הנח את הבלוק במחזיק הדיסק ויישר את הבלוק עם להב הסכין.
4. התקן להב חד פעמי במחזיק החיתוך.
5. חתך את המוח בעובי 10 מיקרומטר. ודא שאין פסים או קווי שריטות ברקמה. בעזרת מברשת צבע, משטחים בזהירות ומשחררים את הרקמה על משטח החיתוך.
6. הרכיבו בזהירות את הרקמה המכילה את חלקי המוח על שקופיות זכוכית PEN נטולות RNase. הפוך את שקופיות הזכוכית הטעונות חיובית עם האצבעות לכיוון הרקמה ולחץ בצורה חלקה על מגלשת הזכוכית כלפי מטה לכיוון קטע הרקמה.
   הערה: טמפרטורת הידיים תעזור לרקמה להיצמד לזכוכית.
7. לאחר הרכבת חלקי המוח על המגלשות, שמור את המגלשות בקופסה בתוך תא ההקפאה ולאחר מכן אחסן אותן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס. לעולם אל תשמור את המגלשות בטמפרטורת החדר.
   הערה: קיפול הרקמה וקריעה נפוצים. לניתוח אחורי מדויק, חשוב למזער ממצאים אלה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
PEN מגלשת זכוכית ממברנה (2 מיקרומטר)	לייקה	1150518
קריוסטט מחקר	לייקה	CM3050s
RNaseZap RNase פתרון טיהור	פישר סיינטיפיק	AM9780
לקלף תבניות הטבעה חד פעמיות	מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים	70182
פתרון נקודתי	מחקר זימו	D3001-1
תרכובת O.C.T. רקמה פלוס	פישר סיינטיפיק	23-730-571