NPC Neurosphere Assay: בדיקה חוץ גופית כדי להעריך את התגובה הנודדת של תאים מבשרי עצבים מן הנוירוספרה

תקציר

מקור: Williams, M. et al. Rapid Detection of Neurodevelopmental Phenotypes in Human Neural Precursor Cells (NPCs).J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את מבחן ההגירה של תאי נוירוספירה עצביים מקדימים – בדיקה במבחנה לחקר התגובה הנודדת של תאים מקדימים עצביים מהנוירוספרה – באמצעות אנליזה מיקרוסקופית.

פרוטוקול

1. בדיקת הגירה נוירוספרית NPC

1. היווצרות נוירוספרה
   1. הוסיפו 1 מ"ל של מדיית הרחבה 100% לצלחת 35 מ"מ ללא מצע ציפוי. יש לדגור על כלים במשך 15 דקות לפחות בטמפרטורה של 37°C לפני ציפוי NPC. הכינו 2-3 מנות כדי להבטיח שיהיו מספיק נוירוספרות לבדיקת נדידת התא.
      הערה: היעדר מצע ציפוי מבטיח כי NPCs להישאר תלוי בתקשורת, אשר חיוני להיווצרות נוירוספרה. ציפוי כלים ימנע היווצרות נוירוספרה.
   2. הרמה, ניתוק ותאי כדור. גלולת תא השהיה מחדש ב-2-5 מ"ל של מדיית התפשטות 100% מחוממת מראש. צלחת 1 מיליון NPCs לתוך כל צלחת 35 מ"מ מוכן בסעיף 1.1.1.
   3. יש לדגור על NPCs בטמפרטורה של 37°C למש....

תוצאות

איור 1: בחירת נוירוספרות לבדיקת הגירה. (A) תמונת ניגודיות פאזה של שדה מייצג של נוירוספרות ב-24 שעות. כל הכדורים הם פחות מ -100 מיקרומטר ולכן אינם נאספים עבור בדיקת הנדידה. (B) תמונת ניגודיות פאזה של שדה מייצג של נוירוספרות ב-72 שעות. כל הכדורים נמצאים בטווח של 100 מיקרומטר ± 20 מיקרומטר, מה שמצביע על כך שהם מוכנים לאיסוף עבור בדיקת הנדידה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מדיום נוירובזלי	תרמופישר סיינטיפיק	21103049	רכיב הן של NIM והן של 100% Expansion Medium
PSC Neural Induction Medium: קישור פרוטוקול: https://goo.gl/ euub7a	תרמופישר סיינטיפיק	A1647801	זוהי ערכה המורכבת ממדיום נוירובזלי (NB) ותוסף אינדוקציה עצבית פי 50 (ש"ח). השקל משמש לייצור 1X Neural Induction Medium ו-100% Expansion Medium
DMEM/F12 בינוני מתקדם	תרמופישר סיינטיפיק	12634-010	רכיב של 100% התרחבות בינונית
Matrigel מוסמך hESC	קורנינג	354277	ג'ל מטריצמימיק חוץ-תאי באישור hESC (ג'ל ECM-mimic)
צלחות 6 בארות	קורנינג	COR-3506	לוחות פוליסטירן המשמשים לתחזוקת NPC ולבדיקת הגירה נוירוספרית
אדם בסיסי FGF-2	פפרוטק	100-18 ב'	גורם גדילה
פניצילין/סטרפטומיצין	תרמופישר סיינטיפיק	15140122	אנטיביוטיקה, רכיב NIM, 100% הרחבה ו-30% הרחבה מדיה