CreER-LoxP system-based Target Gene Inactivation: מערכת Cre Recombinase המושרה בטמוקסיפן לנוקאאוט של גן מטרה במודל עכבר

תקציר

מקור: Hubner, E. K., et al. Constitutive and Inducible Systems for Genetic in vivo modification of mouse hepatocytes using hydrodynamic tail vein injection.J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מתאר הליך של נוקאאוט גן מטרה באמצעות מערכת Cre-recombinase המושרה בטמוקסיפן בעקבות הזרקה תוך צפקית של טמוקסיפן במודל עכבר.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. אינדוקציה של CreER נגוע עם טמוקסיפן

זהירות: טמוקסיפן מזיק, עלול להיות סרטני או לפגוע בפוריות. עיין בדף נתוני הבטיחות.

1. לתכנן זריקות טמוקסיפן intraperitoneal על שלושה ימים רצופים.
2. ביום הראשון, להמיס 10 מ"ג של טמוקסיפן ב 40 μL אתנול. יש לדגור בטמפרטורה של 55°C למשך 10 דקות. מערבולת מספר פעמים עד שהטמוקסיפן מתמוסס.
3. מוסיפים 960 מיקרוליטר שמן תירס. יש לדגור במשך 5 דקות ב-55°C. מערבולת מספר פעמים כדי לקבל תמיסה ברורה.
4. הכן את הפתרון מזרק אינסולין 1-mL עם מחט 27 גרם.
5. לשפשף את העכבר על ידי תפיסת צוואר העכבר בזהירות עם האגודל והאצבע השנייה, קיבוע הזנב בין בסיס היד לבין האצבע הרביעית והחמישית.
6. להזריק 0.1 מ"ל (= 1 מ"ג של טמוקסיפן) של הפתרון intraperitoneally לתוך הרביע התחתון השמאלי של הבטן.
7. חזור על הזריקות בימים השני והשלישי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מזרק Injekt F 1 מ"ל	בראון	9166017V	להזרקה תוך צפקית
טמוקסיפן	סיגמא-אולדריץ'	T5648-1G	להפעלת CreER
שמן תירס	סיגמא-אולדריץ'	C8267-500ML	נשא לזריקות טמוקסיפן