מאמר שיטה

ביטוי גנים מבוסס מערכת מושרה Tet-On ב- Vivo: מערכת ביטוי גנים המושרה על ידי טטרציקלין להפעלת שעתוק גני מטרה במודל עכבר

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Hubner, E. K. et al.מערכות מכוננות ומושרות לשינוי גנטי in vivo של הפטוציטים בעכבר באמצעות הזרקת ורידי זנב הידרודינמיים. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את מערכת ביטוי הגנים טטרציקלין, או Tet-On, במודל עכבר. בנוכחות דוקסיציקלין, נגזרת טטרציקלין, מערכת טט-און המורכבת מחלבון טרנסאקטיבטור מבוקר טטרציקלין הפוך מופעלת ומביעה את הגן המעניין.

פרוטוקול

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. אינדוקציה של ביטוי גן תלוי טטרציקלין או shRNA

זהירות: דוקסיציקלין עלול להזיק. עיין בדף נתוני הבטיחות.

הערה: בהתאם לסוג ומשך הניסוי, ניתן לספק דוקסיציקלין במי השתייה.

  1. עבור ניסויים לטווח קצר (<10 ימים) מתן דוקסיציקלין באמצעות מי שתייה באמצעות הפרוטוקול הבא.
    1. ממיסים 5 גרם סוכרוז ב 100 מ"ל של מי ברז. אוטוקלאב.
    2. להמיס 100 מ"ג של דוקסיציקלין-היקלאט ב 5 מ"ל של תמיסת סוכרוז (שלב 1.1.1) בצינור חרוטי 15 מ"ל.
    3. באמצעות מזרק 10 מ"ל, סטרילי מסנן את התמיסה דרך מסנן 0.2 מיקרומטר. הוסף לתמיסת הסוכרוז שהוכנה בשלב 1.1.1.
    4. ספק תמיסת דוקסיציקלין-סוכרוז כמי שתייה לעכבר. יש לבדוק מדי יום ולהחליף כאשר התמיסה הופכת לעכורה המעידה על צמיחת יתר של חיידקים (יש להחליף תמיסה שקופה לאחר שלושה ימים לכל המאוחר).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
D(+)-Saccharoseקרל רות'4621.1להמתקת תמיסת דוקסיצילין
דוקסיציקלין היקלטAppliChemA2951,0025הפעלה של ביטוי תלוי טטרציקלין
מזרק Injekt 10 מ"לבראון4606108V
פילטרופור S 0.2זארשטדט831.826.001לסינון דוקסיציקלין

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Tet On

מאמרים קשורים