Method Article

טרנספורמציה גנטית בינארית חיידקית מבוססת וקטור כרומוזום מלאכותי בצמחי Arabidopsis: טכניקה ליצירת צמחים טרנסגניים עם החדרת עותק יחיד

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Tark-Dame, M., et al. יצירת צמחים טרנסגניים עם תוספות עותק יחיד באמצעות וקטור בינארי BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

בסרטון זה אנו מדגימים יצירה של צמחי ארבידופסיס טרנסגניים המבטאים טרנסגן יציב באמצעות טרנספורמציה גנטית בינארית בינארית מבוססת כרומוזומים מלאכותיים בתיווך אגרובקטריום.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. ארבידופסיס שינוי

  1. הכינו את צמחי הארבידופסיס לטרנספורמציה.
    1. מגדלים צמחי ארבידופסיס בחממה או בתא גידול מבוקר אקלים עד שהם פורחים (12 עציצים עם 9 צמחים כל טבילה).
    2. חתכו את הברגים הראשונים כדי לאפשר לברגים משניים נוספים להופיע. הצמחים מוכנים לטבילה 4-6 ימים לאחר הגזירה, כאשר לצמחים יש הרבה ראשי פרחים לא בשלים ולא הרבה סיליקים מופרים.
  2. טבילה פרחונית
    1. יש לטבול תפרחות במשך 5-10 שניות בתרחיף אגרובקטריום הנושא T-DNA המשובט עם כרומוזום מלאכותי חיידקי בינארי או BIBAC. השתמש תסיסה עדינה.
    2. עטפו את החלקים שמעל הקרקע של הצמחים בסרט נצמד כדי לשמור על לח....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: מגש מלא בשתילי ארבידופסיס לפני ואחרי טיפול בגלופוזינט-אמוניום. שתילים שאינם מבטאים את גן הבר הקיים ב- PBIBAC-BAR-GW T-DNA מתים לאחר שרוססו בתמיסת גלופוזינט-אמוניום. התמונות מראות את אותו מגש שתילים (A) לפני ריסוס בגלופוזינט-אמוניום, 14 יום לאחר הזריעה, ו-(B) 10 ימים לאחר מכן, לאחר ריסוס פעמיים.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
קנמיצין סולפט מונוהידראטדוצ'פהK0126
תערובת אנזימים Gateway LR clonase תרמו-סיינטיפיק - Invitrogen11791-019
Murashige Skoog בינונידוצ'פהM0221
אגרב.ד.214010
גלופוזינט-אמוניום (בסטה)באייר79391781
מכונת הדמיה של זרחןGE Healthcare מדעי החייםטייפון FLA 7000
סרט נצמד (עטיפת סרן)אומנילאבו1090681
אגרוזתרמו-סיינטיפיק - Invitrogen16500

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Binary Bacterial Artificial ChromosomeAgrobacterium mediated TransformationArabidopsis PlantsSingle copy InsertionFloral Dipping TechniqueFluorescence MicroscopyHerbicide Resistance ScreeningGenomic DNA ExtractionPCR AnalysisSeed specific Promoter

Related Articles