הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
3.7K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Shull, G. et al. מניפולציה של תאי גזע עצביים בודדים ונוירונים בפרוסות מוח באמצעות מיקרו-הזרקה רובוטית. J. Vis. Exp. (2021)
בסרטון זה אנו מדגימים מיקרו-הזרקה רובוטית של רב-סוכרים בעלי תווית פלואורסצנטית לתאי עצב פירמידליים בפרוסות אורגנוטיפיות של מוח עוברי עכבר באמצעות מזרק אוטומטי. המזרק האוטומטי הוא פלטפורמה רובוטית המשתמשת בתמונות המתקבלות ממיקרוסקופ להעברה מדויקת של ביומולקולות מעניינות לתאים בודדים.
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. התקנת תוכנה
2. הכנת ריאגנטים ופיפטות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כימיקלים | |||
| אגרוז, נמס נמוך | קרל רות' | חתול# 6351.2 | |
| אגרוז, רכס פראי | סיגמא-אולדריץ' | Cat# A2790 | |
| דבק Best-CA 221 | הטוב ביותר Klebstoffe GmbH & Co.KG | חתול# CA221-10ml | |
| תוספת B-27 | תרמו פישר סיינטיפיק | חתול# 17504044 | |
| מים מזוקקים | |||
| DMEM-F12, CO2 עצמאי (עם פנול אדום) | סיגמא-אולדריץ' | Cat# D2906 | |
| DMEM-F12, עצמאי CO2 (עם פנול אדום) | סיגמא-אולדריץ' | חתול# D8900 | |
| HEPES-NAOH, pH 7.2, 1M (חיץ HEPES) | קרל רות' | Cat# 9105.3 | |
| ל-גלוטמין, 200 מילימטר | Thermo Fisher Sientific | חתול# 25030024 | |
| מויול 4-88 | סיגמא-אולדריץ' | חתול# 81381 | |
| תוספת N-2 | תרמו פישר סיינטיפיק | חתול# 17502048 | |
| מדיום נוירובזלי | תרמו פישר סיינטיפיק | חתול# 21103049 | |
| מים ללא Nuclease | תרמו פישר סיינטיפיק | Cat# AM9937 | |
| O2 (40%), CO2 (5%), N2 (55%) מיקס, 50 ליטר | |||
| PBS | |||
| פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U/mL) | תרמו פישר סיינטיפיק | חתול# 15140122 | |
| נסיוב חולדות | מעבדות נהר צ'ארלס | ||
| סודיום ביקרבונט (NaHCO3) | מרק | חתול# 106323 | |
| נתרן הידרוקסידי (NaOH) | מרק | חתול# 106482 | |
| המלח של טיירוד | סיגמא | Cat# T2145-10x1L) | |
| ציוד | |||
| נימי זכוכית בורוסיליקט, קוטר חיצוני 1.2 מ"מ x קוטר פנימי 0.94 מ"מ | סאטר אינסטרומנטס | חתול# BF-120-94-10 | |
| מערכת סינון בקבוק-עליון, 500 מ"ל | קורנינג | חתול# 430769 | |
| מחשב מחשב | |||
| מתקן לחץ מותאם אישית | מתקן לחץ מותאם אישית | ||
| וסת לחץ אלקטרוני | פרקר חניפין | חתול# 990-005101-002 | |
| צינורות בז, 15 מ"ל | קורנינג | חתול# 430791 | |
| צינורות בז, 50 מ"ל | קורנינג | חתול# 430829 | |
| מושך מיקרופיפטה בוער/חום | סאטר אינסטרומנטס | חתול# P-97 | |
| מלקחיים, דומונט מס' 3 | כלים מדעיים משובחים | חתול# 11231-30 | |
| מלקחיים, דומונט מס' 5 | כלים מדעיים משובחים | חתול# 11255-20 | |
| מלקחיים, דומונט מס' 55 | כלים מדעיים משובחים | חתול# 11252-20 | |
| בלוק חימום | לאבטק הבינלאומי | חתול # דרי לחסום Digi2 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך | זיס | חתול# אקסיוברט 200 | |
| מקור אור | אולימפוס | Cat# הדגשה 3100 | |
| וסת לחץ ידני | מקמאסטר קאר | חתול# 0-60 PSI 41795K3 | |
| טיפים למיקרו-מעמיסים | אפנדורף | חתול# 5242956.003 | |
| מיקרו-בקר | ארדואינו | חתול# Arduino עקב | |
| מצלמת מיקרוסקופ Hamamatsu Orca פלאש 4.0 V3 | |||
| שלב ממונע XY למיקרוסקופ | |||
| פיפטות פסטר, פלסטיק | |||
| צלחת פטרי, 60X15 מ"מ | גריינר | חתול# 628102 | |
| צלחת פטרי, 35X10 מ"מ | אנונימי | חתול# 153066 | |
| צלחת פטרי, 34X14 מ"מ, כולל זכוכית כיסוי מיקרווול מס' 1.5 | מאטק | Cat# P35G-1.5-14-C | |
| מחזיק פיפטה | וורנר אינסטרומנטס | חתול# 64-2354 MP-s12u | |
| פיפטה וטיפים | |||
| חוט להט מושך, חוט להט קופסה מרובע 3.0 מ"מ | סאטר אינסטרומנט | חתול# FB330B | |
| קופסת דגירה לתרבית פרוסה | MPI-CBG | Cat# בהתאמה אישית | |
| שסתום סולנואיד | חתול# LHDA053321H-A | ||
| צנטריפוגה שולחנית | הראיוס | חתול# 5431622 | |
| המדחום | |||
| מניפולטור תלת צירי | Sensapex Inc | Cat# ציר עץ uMP | |
| ויברטומה | לייקה | Cat# VT1000s | |
| אינקובטור שלם-עובר-תרבית-מערכת | חברת איקמוטו | חתול# RKI-10-0310 | |
| אמבט מים | |||
| תוכנה ואלגוריתמים | |||
| ארדואינו | ארדואינו | ||
| פיג׳י | RRID: SCR_002285 | ||
| פיתון | בסיס Python Software | פייתון 2.7.12 | |
| זן | RRID: SCR_013672 |
