Assay הקמת הצינור משמש להערכת פעילות כלי הדם של תאים סרטניים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים
במאמר זה
סיכום
תקציר
במהלך העשורים האחרונים, assay היווצרות צינור באמצעות גורם הגדילה מופחת Matrigel כבר מועסקים בדרך כלל כדי להדגים את פעילות angiogenic לתאי אנדותל של כלי דם במבחנה 1-5. עם זאת, הראיות לאחרונה גדל הראה כי זה assay אינו מוגבל לבחון את התנהגותו של כלי הדם ותאי האנדותל. במקום זאת, הוא גם נעשה שימוש כדי לבחון את היכולת של מספר תאים סרטניים לפתח פנוטיפ וסקולרית 6-8. יכולת זו עולה בקנה אחד עם התנהגות vasculogenic שלהם מזוהה בחיות xenotransplanted, תהליך המכונה vasculogenic חיקוי (VM) 9. יש שפע של ראיות להוכיח כי VM גידול התא בתיווך ממלא תפקיד חיוני בהתפתחות הגידול, עצמאית של אנגיוגנזה תא האנדותל 6, 10-13. לדוגמה, תאים סרטניים נמצאו להשתתף היווצרות perfused דם, כלי דם בתוך ערוץ דגימות רקמה של חולים מלנומה גליובלסטומה 8, 10, 11. כאן, אנו תיאר assay רשת צינורי ככלי שימושי להערכת הפעילות vasculogenic של תאים סרטניים. מצאנו כי כמה שורות תאים סרטניים כגון מלנומה B16F1 תאים, גליובלסטומה U87 תאים סרטן השד מד"א-MB-435 תאים מסוגלים טופס tubules כלי הדם, אך יש כאלה שלא כמו סרטן המעי הגס HCT116 תאים. יתר על כן, זה פנוטיפ כלי הדם תלויה מספרים התא מצופה על Matrigel. לכן, assay זה עשוי לשמש כלי רב עוצמה למסך את הפוטנציאל של כלי הדם של מגוון רחב של סוגי תאים כולל תאים של כלי הדם, תאים סרטניים, כמו גם תאים אחרים.
פרוטוקול
1. Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים
- הכנת תאים סרטניים לתאי אנדותל כלי הדם: גידול במוח תאים כגון U87 תאים, התאים B16F1 מלנומה, סרטן השד MDA-MB-435, ותאי המעי הגס HCT116 גדלו DMEM בתוספת 10% FBS ו פניצילין / סטרפטומיצין (כולם Invitrogen ). האנדותל קו התא בתאי אדם אנדותל כלי הדם (HMVECs) היו בתרבית בינוני EBM2 (Lonza) בתוספת הידרוקורטיזון מיקרוגרם / מ"ל ו - 1 1 ng / ml גורם הגדילה באפידרמיס, 10% FBS ו פניצילין / סטרפטומיצין. תאים נשטפו עם PBS שלוש פעמים מנותקת עם 0.05% טריפסין / EDTA (Invitrogen....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
על מנת assay הזה להצליח, איכות Matrigel יש לבדוק תחילה. מדגם קטן ניתן לקבל BD Bioscience מראש בטווח assay באמצעות HMVECs. מוצרים אצווה שונים עשויים להציג איכויות שונה שבו הרבה מסוימים אינם מספקים מצב אופטימלי להקמת הצינור. שנית, כל הבועות יש להימנע כאשר aliquot של Matrigel נטען צלחות 96 ובכן, מפני היווצרות בועות יכולים לשבש אבובית. אם בועות קטנטנות מצויים היטב, Matrigel ניתן להעביר מיד בחזרה את הצינורות Matrigel המקורי שאמור להיות כל הזמן על הקרח במהלך הניסוי. בנוסף, נבדקו תאים יש.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי NCI R01 CA120659 (RS).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם מגיב | חברה | מספר קטלוגי | |
| DMEM | Invitrogen | 11995 | |
| FBS | Invitrogen | 16000-044 | |
| גורם צמיחה מופחת Matrigel | Bioscience BD | 47743-720 | |
| EBM2 ערכת | Lonza | CC-3156 | |
| Nikon Eclipse מיקרוסקופ TS100 | ניקון |
מקורות
- Shao, R., Guo, X. Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis. Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).
- Ribeiro, M. J.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
