הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
910 צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Curtis, B. N. et al., Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions. J. Vis. Exp. (2022).
סרטון זה מתאר את הטכניקה של חקר הרכבת חלבון ספטין על מיקרוספרות מצופות בדו-שכבות ליפידים. טכניקה זו מסייעת בהבנת המכלולים תלויי העקמומיות של חלבון על משטחים מעוקלים.
1. דו-שכבות שומנים נתמכות כדוריות
הערה: פרוטוקול זה משתמש במיקרוספרות סיליקה המרחפים במים אולטרה-טהורים בצפיפות של 10%. עבור כל עבודה על הפרמטרים הקינטיים של הרכבת חלבונים, חשוב לשלוט בקפידה על שטח הפנים הכולל של הממברנה בין ניסויים לעקמומיות. טבלה 1 מציגה את הנפחים המתוקנים של חרוזים וחיץ כדי לשמור על 5 מ"מ2 משטח הפנים הכולל של הממברנה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.2 מ"ל צינורות PCR עם מכסה שטוח, טבעי | ווטסון | 137-211ג(EX) | |
| 0.5 מ"ל צינורות הדבקה נמוכה | ארה"ב סיינטיפיק | 1405-2600 | |
| בטא מרקפטואתנול (BME) | סיגמא-אולדריץ' | M6250-100ML | |
| אלבומין בסרום בקר (BSA) | סיגמא-אולדריץ' | A4612-25G | |
| זכוכית כיסוי להכנת כיסויים PEGylated | תרמו סיינטיפיק | 152450 | ריצ'רד-אלן מדעי SLIP-RITE כיסוי זכוכית 24x50 #1.5 |
| DOPC | אוונטי פולאר ליפידים | 850375 | |
| ביצה ליס רודאמין PE | אוונטי פולאר ליפידים | 810146 | |
| HEPES | סיגמא אולדריץ' | H3375-1 ק"ג | |
| מתיל צלולוז 4000cp | סיגמא-אולדריץ' | M052-100G | |
| מיני צנטריפוגה | |||
| מיקרוספרות סיליקה לא פונקציונליות | Bangs Laboratories, Inc. | תלוי בגודל: SS0200*-SS0500* | סיליקה בתרחיף מימי |
| דבק אופטי | נורלנד תורלאבס | נועה 68 | דבק גמיש לזכוכית או פלסטיק |
| אשלגן כלורי | VWR | 0395-1 ק"ג | |
| אמבט סוניקטור | ברנסון | 1510R-MT | שואב אולטראסוני Bransonic. 50-60 הרץ. פלט: 70W |
| סויה PI | אוונטי פולאר ליפידים | 840044 | |
| צנטריפוגה שולחנית | אפנדורף | 22331 | |
| מנורת UV | ספקטרולין | ENF-260C | 115 וולט, 60 הרץ, 0.20 אמפר |
