ניטור דינמיקת גיוס נויטרופילים ועומס חיידקים באתר ההדבקה במודל מורין

תקציר

מקור: Anderson, L. S., et al. מודל עכבר להערכת תגובה חיסונית מולדת לזיהום סטפילוקוקוס זהוב. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים הדמיה in vivo כדי לחקור את דינמיקת גיוס הנויטרופילים באתר זיהום בעכבר מהונדס מדוכא חיסון עם נויטרופילים המבטאים GFP. זה כרוך הזרקת חיידקים זוהרים כדי לגרום לזיהום. זה מוביל גיוס נויטרופילים לאתר הזיהום, אשר מעקב נעשה על ידי הדמיה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. מקור עכבר ודיור

1. להפיק עכברי LysM-eGFP על רקע גנטי C57BL/6J. להפיק LysM-EGFP×MyD88^-/- עכברים על ידי חציית עכברי LysM-EGFP עם עכברי MyD88^-/- על רקע C57BL/6J.
2. עכברי בית בויבריום. עבור מחקרים אלה, בעלי חיים שוכנו באוניברסיטת קליפורניה, דייוויס בקבוצות לפני הניתוח וביחידות לאחר הניתוח. השתמש בעכברים בין הגילאים 10-16 שבועות.

2. הכנה וכימות חיידקים

1. הסר את זן S. aureus הביולומינסנטי המ....

תוצאות

איור 1: מתאם בין ספירת OD₆₀₀ ו-CFU עבור מושבות ALC2906 3-4 ALC2906-SH1000 נקטפו מצלחת אגר והועברו ל-TSB עם כלוראמפניקול של 10 מיקרוגרם/מ"ל לתרבית לילה. למחרת, המתלה פוצל 1:50 ל-TSB עם כלוראמפניקול 10 מיקרוגרם/מ"ל ותורבת. צפיפות אופטית של 600 ננומטר (OD₆₀₀) נמדדה במרווחי זמן קבועים לאחר שעתיים באמצעות ספקטרופוטומטר. בכל מדידה, החיידקים דוללו בקנ"מ 1:100,000 ב-PBS קר כקרח והועלו על צלחת אגר לצורך דגירה למשך הלילה.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
14 מ"ל פוליפרופילן צינור תחתון עגול	בז	352059
ניקוב ביופסיה חד פעמי 6 מ"מ	אינטגרה מילטקס	33-36
ביולומינסנט S. aureus	לויד מילר, ג'ונס הופקינס	ALC 2906 SH1000
אגר דם בקר, 5%, הארדי דיאגנוסטיקה	VWR	10118-938
Buprenoprhine hydrochloride הזרקה	אספקה רפואית מערבית	7292	0.3 מ"ג/מ"ל
עכברי C57BL/6J	ג'קסון לברטורי	664
כלוראמפניקול (אבקה גבישית)	פישר ביוריאגנטים	BP904-100
DPBS (1X)	גיבקו	14190-144
מזרקי אינסולין	בקטון, דיקסון ושות'	329461	0.35 מ"מ (28 גרם) x 12.7 מ"מ (1/2 אינץ')
מערכת הדמיה IVIS Spectrum In Vivo	פרקין אלמר	124262
תוכנת Living Image – סדרת IVIS Spectrum	פרקין אלמר	128113
עכברי LysM-eGFP	תומאס גראף אלברט איינשטיין קולג' בניו יורק	נה
ספקטרופוטומטר מיקרו-נפח	תרמופישר סיינטיפיק	ND-2000
עכברי KO MYD88	ג'קסון לברטורי	9088
ספוגים לא ארוגים	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5X5 ס"מ
פובידון יוד 10% תמיסה	אפליקר	697731
מרק סויה טריפטי	בקטון, דיקסון ושות'	211825