$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. השראת דלקת פני העין של מורין
- בצע הכנת אימונוגן לחיסון.
- הכינו את האימונוגן טרי ביום החיסון, ערבבו אובלבומין (OVA, 50 מ"ג/מ"ל) ורעלן שעלת (100 מק"ג/מ"ל) במי מלח ובאלומיניום הידרוקסיד אדג'ובנטי (40 מ"ג/מ"ל) (ראו טבלת חומרים) ביחס של 1:1.
זהירות: בצע את הפתיחה, ההרכבה מחדש והכנת האימונוגן של רעלן שעלת בארון בטיחות למינרי. לבשו ביגוד מגן והימנעו מכל מגע עם העור.
- לדגור על תערובת האימונוגן והאדג'ובנט בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות ולטעון 100 μL לתוך מזרק 1 מ"ל.
- בצע הזרקה intraperitoneal של הפתרון immunogen בעכבר לא מורדם.
- החזק את העכבר ברכות בזנב תוך אחיזה ברשת הכלוב. החזיקו בחוזקה את עור הגב ואת אזור הצוואר בין האגודל לאצבע המורה וקבעו את הזנב והגפיים התחתונות בין הטבעת לאצבע הקטנה כנגד כף היד.
- שמור על העכבר הקבוע כשראשו כלפי מטה.
- להזריק 100 μL של פתרון immunogen מוכן ברביע הימני או השמאלי של חלל הבטן התחתונה.
- בצע אתגר משטח העין שבועיים לאחר החיסון.
- להרדים את העכבר עם isoflurane (2.5%).
- יש למרוח 5 מיקרוליטר של OVA (50 מ"ג/מ"ל) או מי מלח (0.9% NaCl) לכל עין על שתי העיניים ולהמתין עד שהטיפה תיספג בעין. זה לוקח ~ 5 דקות.
- חזור על ההליך 1x מדי יום במשך 7 ימים.
הערה: הממשל המקומי של תרופות יכול להיעשות באותו אופן.
2. אוסף הפרשות עיניים
- לשחזר את exudates העין שנוצרו במהלך שלב האתגר על ידי מריחת 50 μL של מלוחים סטריליים על העין מיד לאחר האתגר.
3. כריתה של רקמות פני השטח של העין
- נתחו את העפעפיים ואת גלובוס העיניים לפי השלבים הבאים.
- הרדימו את העכבר על ידי חנק CO2 ונקע צוואר הרחם.
- הנח את העכבר על משטח אחיד.
- לחטא את אזור המסלול סביב העין עם מטוש ספוג עם 70% אתנול.
- בצע חתך בין האוזן לסינוס הרטרו-אורביטלי ולאורך פני השטח מעל עצם הקשקש אנכית, הרחבת החתך אופקית מתחת לעפעף התחתון לאורך העצם המקסילרית ומעל העפעף העליון לאורך העצם הקדמית. זה יוצר חתך סביב העין (איור 1).
- החזיקו בזהירות את הרקמה המנותחת סביב העין באמצעות מלקחיים מעוקלים ומשכו את הרקמה ואת גלגל העין החוצה.
- מניחים את האיברים שנכרתו ב-PBS סטרילי.
- חתוך רקמת שריר פנים עודפת סביב העפעפיים העליונים שנכרתו באמצעות אזמל ומתחת לסטריאומיקרוסקופ.
- אסוף את הלחמית לפי השלבים הבאים.
- הניחו את העפעף העליון על צלחת פטרי יבשה מתחת לסטריאומיקרוסקופ.
- בעזרת פינצטה עדינה ואזמל, מקלפים את השכבה הלבננבה-רירית בעדינות רבה מהמשטח הפנימי של העפעף.
- לאחר מכן, לנתח את הקרנית בעקבות השלבים הבאים.
- הניחו את גלובוס העיניים על צלחת פטרי יבשה חדשה על גבי קרח יבש למשך 3 דקות.
- קח את צלחת פטרי על משטח הספסל במצב יציב.
- בצע חתך קטן בגבול הקרנית ליד הלימבוס באמצעות מספריים חדים עדינים.
- האריכו את החתך עם האזמל סביב גלובוס העין, תוך הפרדת לובן העין מהקרנית.
- הסר את שאריות הקשתית והעדשה מהחלק האחורי של הקרנית על ידי שטיפה נדיבה בתמיסת מלח.
