דינמיקה של אברונים בלימפוציטים מסוג B לאחר הפעלה עם חרוזים מצופים אנטיגן

תקציר

מקור: Ibañez-Vega, J., et al., חקר דינמיקה של אברונים בתאי B במהלך היווצרות סינפסות חיסוניות. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה אנו מתארים שיטה לחקר הדינמיקה של אברוני הלימפוציטים מסוג B בעקבות הפעלתם עם מיקרו-כדוריות מצופות אנטיגן.

פרוטוקול

הערה: השלבים הבאים בוצעו באמצעות תאי IIA1.6 B.

1. הפעלת תאי B עם חרוזים מצופים אנטיגן

1. הכנת חרוזים מצופים אנטיגן
   1. כדי להפעיל תאי B, השתמשו ב-NH_2-beads המצופים באופן קוולנטי באנטיגן (חרוזים מצופים Ag), אשר מוכנים באמצעות 50 μL (~20 x 10⁶ חרוזים) של 3 מיקרומטר NH_2-beads עם אנטיגנים מפעילים (BCR-ligand+) או לא מפעילים (BCR-ligand-).
   2. עבור IIA1.6 תאי B משתמשים במקטע anti-IgG-F(ab')₂ כ-BCR-ligand+ ואנטי-IgM-F(ab')₂ או אלבומין בסרום בקר (BSA) כ-BCR-ligand-. כדי להפעיל תאי B ראשיים או קו תאי IgM+ B, השתמש ב- ant....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
IIA1.6 (גרסה A20) עכבר B-לימפומה תאים	ATCC	TIB-208	לימפומה של תאי B מורין ממקור Balb/c המבטאת BCR המכיל IgG על פני השטח שלה ללא FcγIIR
100% מתנול	פישר סיינטיפיק	A412-4
משקפי כיסוי בקוטר 10 מ"מ עובי מס' 1 עגול	מריאנפילד-סופיריור	111500
Amino-Dynabeads	תרמופישר	14307ד
אנטי פריצנטרין	אבקאם	dorit_1999	דילול 1:200 מומלץ אך צריך להיות אופטימלי
אנטי-ראב6	אבקאם	ab95954	דילול 1:200 מומלץ אך צריך להיות אופטימלי
אנטי-סק61	אבקאם	dorit_15575	דילול 1:200 מומלץ אך צריך להיות אופטימלי
BSA	וינקלר	BM-0150
מיקרוספרות אמינו Polybead 3.00μm	פוליסיינס	17145-5
פולי-ל-ליזין	סיגמא	P8920	לדלל במים סטריליים
RPMI-1640	תעשיות ביולוגיות	01-104-1א
טריטון X-100	מרק	9036-19-5
שפופרת 50 מ"ל	קורנינג	353043