טכניקת מבחנה לגירוי לימפוציטים באמצעות חיידקים פתוגניים

תקציר

מקור: Dousha, L., et al. הערכת תגובות חיסוניות נשימתיות להמופילוס אינפלואנזה. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה לגירוי לימפוציטים באמצעות המופילוס אינפלואנזה (NTHi) שאינו ניתן להקלדה ולהערכת התגובה החיסונית. דגירה של תאי דם חד-גרעיניים היקפיים מבודדים (PBMCs) עם NTHi גורמת לתאי החיידק לעורר לימפוציטים מסוג T, מה שמוביל לייצור ציטוקינים. עם עיכוב הפרשת הציטוקינים, מבוצעת צביעה אימונופלואורסצנטית כדי לזהות את הציטוקינים התוך-תאיים שהצטברו בלימפוציטים T מגורים.

פרוטוקול

1. הכנה אנטיגנית

הערה: ניתן להשתמש בשלושה תכשירים אנטיגניים שונים כדי להעריך את התגובה החיסונית ל-Hi. אלה הם 1) מרכיב תת-תאי (בדרך כלל מדופן התא החיידקי); 2) חיידקים מומתים ומומתים; ו-3) חיידקים חיים. לקבוע את השימוש של כל תכשיר אנטיגני לפני תחילת כל הניסויים.

1. רכיבים תת-תאיים
   1. להשיג רכיבים תת-תאיים ממקורות, כולל תכשירים מסחריים, רכיבים שפותחו בתוך החברה ו/או מחוקרים אחרים.
      הערה: ניתן להשתמש ברכיבים תת-תאיים בדרך כלל מדופן התא החיידקי הכוללים חלבונים בעלי קרום חיצוני כגון P6 וליפוליגוסכריד (LOS). רכיבים תת-תאיים אלה נגזרים בדרך כלל במרכזים מיוחדים. התיאור של אי....

תוצאות

איור 1: ייצור ציטוקינים ברקמת ריאה. תאים מנותחים תחילה עבור הביטוי שלהם של סמן לויקוציטים CD45 (A) באמצעות ציטומטריית זרימה. אוכלוסייה זו מנותחת בהמשך עבור ביטוי CD3 (B) וביטוי CD4/CD8 (C). תאי CD3 / CD4+ מוערכים לייצור ציטוקינים תוך תאיים בדגימות בקרה (D) ו- NTHi מגורה (E).

....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אמוניום כלורי	סיגמא אולדריץ'	213330
ברפלדין	סיגמא אולדריץ'	B6542
CD28	תרמופישר	16-0289-81
CD49d	תרמופישר	534048
ספונין	סיגמא אולדריץ'	8047152