טכניקה להערכת התגובה החיסונית נגד אנטיגן על ידי גרימת דלקת בעור

תקציר

מקור: Yao, Y., et al. Intravital Imaging of Neutrophil Priming using IL-1β Promoter-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

סרטון זה מדגים טכניקה in vivo להערכת אנטיגן בדיקה על ידי גרימת דלקת עור במודל מורין. האנטיגן הנבדק - הפטן בתמיסת שמן/אצטון - נמרח באופן מקומי על עור אוזן העכבר, ודלקת העור מוערכת לאחר תקופה מספקת.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. השראת דלקת עור בעכברים pIL1-DsRed

1. מרדימים עכבר על ידי הזרקה תוך צפקית (כלומר ) של קוקטייל הרדמה המכיל 100 מ"ג/ק"ג קטמין, 10 מ"ג/ק"ג קסילזין ו-1 מ"ג/ק"ג אצפרומזין. עכברים מורדמים כראוי אינם מראים נסיגה של כפות אחוריות לצביטה בבוהן.
2. יש למרוח קרם להסרת שיער על המשטח הגבי של שתי אוזני העכבר. המתן 30 שניות עד דקה. נגבו את משטח האוזן בצמר גפן רטוב במים והניחו לו להתייבש באוויר.
3. מדוד את עובי האוזן באמצעות מיקרומטר והחלף את העכבר בכלוב נפרד. יש להתבונן עד להחלמה מהרדמה (~ 15 - 30 דקות). כדי לפתור דלקת עור הנגרמת על ידי המוצר להסרת שיער, לאפשר לעכבר לנוח במשך 3 ימים לפני ביצוע ניסויים נוספים.
4. הכינו 1.25% (עם v) אוקסזולון (OX) על ידי המסת 16.7 מ"ג OX ב-1 מ"ל אצטון וערבוב 750 מיקרוליטר של תמיסת אוקס/אצטון עם 250 מיקרוליטר שמן זית. הכן פתרון רכב על ידי ערבוב 750 μl של אצטון עם 250 μl של שמן זית.
5. מרדים מחדש עכבר על ידי הזרקה intraperitoneal (i.p.) של קוקטייל הרדמה (1.1). מדדו את עובי האוזן כמו קודם.
6. יש למרוח 12.5 מיקרוליטר של 1.25% OX על כל צד של אוזן ימין. יש למרוח 12.5 מיקרוליטר של תמיסת אצטון/שמן זית על כל צד של אוזן שמאל.
7. יש להפריד את העכבר מחבריו לכלוב עד להחלמה מלאה כדי למנוע פגיעה באוזניו על ידי עכברים אחרים, ולאחר מכן החלף את העכבר בכלוב המקורי שלו והחזיר אותו למתקן למגורי בעלי חיים.
   הערה: הסרת שיער עלולה לגרום לדלקת עור קלה בעקבות שינוי עובי האוזן. דלקת קלה זו תיפתר כעבור 3 ימים ותאושר על ידי עובי אוזניים תקין. לאחר מריחה מקומית במשך 24 שעות, אוזניים שטופלו ב-OX מראות נפיחות משמעותית (p < 0.01) בהשוואה לאוזניים שטופלו בתמיסת רכב בלבד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קטמין הידרוכלוריד	הוספירה	NDC 0409-2051-05
קסילזין	מעבדת LLOYD	NADA #139-236
אצפרומזין	בורינגר אינגלהיים	ענדה 200-361
קרם להסרת שיער	צ'רץ' ודווייט
אצטון	פישר סיינטיפיק	A16P4
אוקסזולון	סיגמא-אולדריץ'	E0753