יצירת פצע עור כריתתי במודל עכבר באמצעות ביופסיית אגרוף

תקציר

מקור: Anderson, L. S. et al., מודל עכבר להערכת תגובה חיסונית מולדת לזיהום סטפילוקוקוס זהוב. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים הליך ביופסיית ניקוב ליצירת פצע מדויק במודל עכבר. הכריתה חושפת את השכבה התת עורית של העור, ומספקת אתר מתאים לחקר תגובות חיסוניות לזיהום פתוגן מקומי.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. מקור עכבר ודיור

1. הפיקו עכברי Lysozyme M- חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (LysM-eGFP) על רקע גנטי C57BL/6J כפי שתואר קודם לכן. גזור LysM-EGFP× התמיינות מיאלואידית תגובה ראשונית 88 (MyD88)-/- עכברים על ידי חציית עכברי LysM-EGFP עם עכברי MyD88-/- על רקע C57BL/6J.
2. עכברי בית בויבריום. עבור מחקרים אלה, בעלי חיים שוכנו באוניברסיטת קליפורניה, דייוויס בקבוצות לפני הניתוח ושוכנו בנפרד לאחר הניתוח. השתמש בעכברים בין הגילאים 10-16 שבועות.

2. פצע עור כריתתי

1. יש לתת 100 μL של 0.03 מ"ג/מ"ל buprenorphine hydrochloride (~0.2 מ"ג/ק"ג) לכל עכבר באמצעות הזרקה intraperitoneal.
2. עשרים דקות לאחר ההזרקה, מניחים 2-4 עכברים בתא עם 2-3 ליטר לדקה (LPM) חמצן עם 2-4% isoflurane. לאחר הרדמה מלאה של העכברים, העבירו את העכברים אחד בכל פעם לקונוס אף המחובר לחמצן 2-3 LPM עם 2-4% איזופלורן. ודא שהעכברים מורדמים במלואם על ידי צביטה חזקה של כל כפה אחורית בין האגודל לאצבע. המשך לשלב הבא אם החיה אינה מגיבה לצביטה.
3. יש לגלח קטע בגודל 1 אינץ' על 2 אינץ' בגב העכבר בעזרת קוצצים חשמליים ולנקות את האזור מגזירי פרווה באמצעות מגבון נקי או גזה. הימנע משימוש תחליב depilatory כי זה עלול לגרום דלקת עודפת.
4. נקה את גב העכבר תחילה עם 10% גזה ספוגה ביוד פובידון ולאחר מכן עם 70% גזה ספוגה אתנול. נקו את האזור בתבנית ספירלית, תוך תנועה החוצה ממרכז אזור הניתוח. יש להמתין כדקה לייבוש אזור הניתוח לפני הניתוח.
5. החזק את גב העכבר המגולח באופן רופף בין שתי אצבעות ולחץ בחוזקה ביופסיית אגרוף סטרילית בקוטר 6 מ"מ במרכז אזור הניתוח המוכן. אין למשוך את העור מתוח.
   1. סובבו את ביופסיית הניקוב כדי ליצור מתאר עגול על העור שחותך את העור במלואו לפחות בחלק אחד של המתאר. היזהרו לא לחתוך לתוך הפאשיה או הרקמה שמתחתיה.
   2. השתמש במספריים סטריליים ומלקחיים כדי לחתוך דרך האפידרמיס והדרמיס בעקבות התבנית המעגלית המוטבעת על ידי ביופסיית הניקוב.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ניקוב ביופסיה חד פעמי 6 מ"מ	אינטגרה מילטקס	33-36
Buprenoprhine hydrochloride הזרקה	אספקה רפואית מערבית	7292	0.3 מ"ג/מ"ל
עכברי C57BL/6J	ג'קסון לברטורי	664
עכברי LysM-eGFP	תומאס גראף אלברט איינשטיין קולג' בניו יורק	נה
עכברי KO MYD88	ג'קסון לברטורי	9088
ספוגים לא ארוגים	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5X5 ס"מ
פובידון יוד 10% תמיסה	אפליקר	697731